#11  
قديم 10-20-2015, 12:37 AM
رافت ابراهيم رافت ابراهيم غير متواجد حالياً
عضو ذهبي
 
تاريخ التسجيل: Dec 2011
المشاركات: 520
افتراضي نحو فهم الجزيئي للبرادر ويلي وAngelman المتلازمات

 

https://translate.googleusercontent....mzq2q5zTiRXhNA



http://hmg.oxfordjournals.org/content/8/10/1867.full



متلازمة برادر ويلي (PWS) ومتلازمة أنجلمان (AS) هما الاضطرابات العصبية المتميزة التي تعين الإنسان كروموسوم 15q11-Q13 وإشراك الاضطرابات من مطبوع التعبير الجيني. ويتسبب PWS عن نقص الأب التعبير الجيني وتسبب AS عن نقص في التعبير الجيني الأمهات. وقد ركزت التجارب في العام الماضي على التحليل الجزيئي للمنطقة الكروموسومات البشرية وكذلك المنطقة المتجانسة على كروموسوم الماوس المركزي وقد تم تحديد 7. النصوص والإكسونات جديدة وحالة جينية من PWS / AS كانت المنطقة لدى الفئران والبشر فحصها. اتسمت مركز يطبع الذي افترض للسيطرة على التبديل بين epigenotypes الأم والأب أيضا بمزيد من التفصيل ونموذج الفأر أن يحذف عنصر مثلي يدل على الحفظ في يطبع وظيفة مركز بين الفئران والبشر. وبالإضافة إلى ذلك، فقد كشف تحليل عدم الحذف-AS المرضى الذين UBE3A داخل الجين الطفرات وجدت في عدد كبير من الحالات. ومع ذلك، كل المرضى من البشر والنظم نموذج الفأر تشير إلى أن جينات أخرى قد تسهم أيضا في AS النمط الظاهري. وهكذا، وإن كان قد تعلم الكثير في العام الماضي، ما زالت هناك حاجة قدرا كبيرا من المعلومات قبل أن يتم فهم هذه متلازمات معقدة تماما.
تقديم

في الثدييات، كلا الوالدين يسهم المعلومات الوراثية المتساوية لأبنائهم. هذه تكملة مضاعفا العادي يعني أن معظم الجينات جسمية سيتم التعبير عن كل من الأم والأب الأليلات. مجموعة صغيرة من الجينات تتحدى هذا الوضع مندلية العادي من الميراث. بدلا من ذلك، يتم التعبير عن الجينات مطبوع من واحد فقط من الاليلين بطريقة الأم لالمعتمد على الأصل. وقد تم تصميم هذه الجينات كما مطبوع لأنها تحتفظ بهوية الأبوية التي حصلوا عليها خلال عملية تكوين الأمشاج. ودبر تنظيم الجينات مطبوع عن طريق تعديل جينية لDNA. على هذا النحو، الجينات مطبوع ليست عرضة للتغيرات فقط في التسلسل الجيني ولكن أيضا لاضطرابات في برنامج جينية التي تسيطر على هذه الجينات.
آليات السيطرة يطبع الجينوم من المحتمل أن تكون معقدة في الوقت الحاضر غير مفهومة (+1 - 4). ما هو واضح هو أن الانحراف عن مقتضى الأصل لالمعتمد على أصل التعبير قد يكون له عواقب وخيمة على الحي. وقد تم الآن تحديد الشاذة مطبوع التعبير الجيني لتكون سببا في عدد من الأمراض التي تصيب الإنسان، بما في ذلك متلازمة برادر ويلي (PWS) ومتلازمة أنجلمان (AS)، مؤكدا على أهمية التعبير والدية محددة الصحيح من الجينات مطبوع.
PWS وAS مثالين الكلاسيكية من يطبع في البشر (5، 6). PWS ونتيجة من العيوب الجزيئية في 15q11-Q13 التي تسبب فقدان التعبير عن كتب أبويا وكتب أمهات الجينات، على التوالي. وسيركز هذا الاستعراض على الجهود المكثفة من العام الماضي لتوضيح الآلية التي تسيطر على كروموسوم 15q11-Q13 التعبير الجيني مطبوع.

المسببات الوراثية من PWS وAS

PWS وAS هي سريريا الاضطرابات العصبية واضحة. الميزات الرئيسية المرتبطة PWS وانخفضت مساهمة نشاط الجنين، ونقص التوتر والتغذية الصعوبات حديثي الولادة، فرط الأكل مع السمنة والنفسي والتخلف العقلي (MIM 176270). وتشمل المظاهر السريرية للAS ضعف شديد المعرفي، والمضبوطات، وترنح والضحك غير مناسب (MIM 105830). تحدث كل من المتلازمات مع تردد تقريبي من 1 في 15 000 (7، 8). وقد تم تحديد العديد من الآليات الجزيئية التي تؤدي إلى PWS وAS، بما في ذلك الحذف كبيرة، disomy أحد الأبوين، والطفرات داخل الجين، والطفرات يطبع ونقل المواقع متوازن نادرة (الجدول 1) (5). في جميع الحالات، وفقدان التعبير واحدة على الأقل أعربت أبويا أو أحد أعربت أمهات الجينات، على التوالي، في 15q11-Q13 هو الحدث المسبب للمرض في تطوير هذه المتلازمات.
الخلل الجزيئي مما أدى الأكثر شيوعا لهذه المتلازمات هو حذف الكروموسومات كبيرة (~4 ميجا بايت) التي تضم مجموعة كبيرة من الجينات مطبوع (2-3 ميغابايت) ومجال غير مطبوع (1-2 ميغابايت) (9، 10 ). ميراث الأب من نتائج الحذف في PWS بينما الميراث الأمهات تنتج AS. بالإضافة إلى نفس معدل الحدوث (~70٪)، والحذف في PWS وAS تحتل نفس الموقف وراثي خلوي، 15q11-Q13. التحليل الجزيئي للنهايات نقطة توقف يشير إلى أن الغالبية العظمى من الحذف تتجمع في مواقع مميزة (9، 11). تم تعيين مجموعتين نقطة توقف القسيم المركزي لZNF127، مع المحاسبة توقف أكثر الداني ل~65٪ من الحذف (12). تم تعيين الكتلة توقف البعيدة telomeric إلى P مكان. ويمكن أن يعزى عدم الاستقرار المتأصل في 15q11-Q13 لتعرب عن نسخة منخفضة تكرار تسلسل الذي يقع في المنطقة المجاورة للتجمعات نقطة توقف (12، 13). ويبدو أن هذا التسلسل إلى أن مقرها داخل الجين HERC2، الذي يشفر العملاق وكان الحاخام هيشت (مثلي لE6-AP-C محطة) وRCC1 (منظم من التكثيف لونين) البروتين نطاق ويقع telomeric إلى P (13). أعرب سبعة على الأقل الكاذبة الناجمة عن الازدواجية الجينومية من HERC2 موجودة في الجينوم البشري، بما في ذلك نسختين التي تقع مجاورة للمكان HERC2 في 15q13، ثلاثة الكاذبة التي تم translocated إلى 15q11 واثنين الخادعة الموجودة في 16p11.2 (الشكل . 1). الأحداث كروس غير المتكافئة بين تكرار تسلسل في 15q11 و15q13 المرجح أن تولد الحذف كبيرة لوحظت في PWS وAS (14، 15). على عكس الإنسان، جينوم الفأر لديه نسخة واحدة فقط من الجين Herc2 ولا الخادعة (13، 16). من غير المرجح الجين HERC2 / Herc2 أن يكون مطبوع بالنظر إلى أن يتم التعبير عن ذلك في الهجينة خلية جسدية مع الأمهات واحدة أو كروموسوم الأب واحد 15، ويقع في منطقة غير مطبوع في البشر والفئران والطفرات في Herc2 الفئران موروثة كصفة متنحية (13، 16).

الجدول 1
دروس الجزيئية من برادر ويلي والمتلازمات Angelman

بالإضافة إلى الحذف الكروموسومات كبيرة، وقد تم تحديد الحذف الصغرى أصغر تقع المنبع من الجين SNRPN (17، 18، 19، 20، 21). ويبدو أن هذه الحذف المترجمة لتعطيل برنامج جينية الذي ينظم مطبوع التعبير الجيني عبر 15q11-Q13، تعريف رابطة الدول المستقلة المفترضة -acting مركز التحكم يطبع (IC) (20). وهذا يعني أنه في حين أن كروموسوم 15 المعروضات وضع متحدر من والدين الطبيعي للالميراث، AS المرضى الذين لديهم اثنين من الكروموسومات مع هوية الأب (hypomethylation والتعبير biallelic من الجينات وأعرب أبويا) والمرضى PWS واثنين من الكروموسومات مع هوية الأم (hypermethylated وجينات الأب الصامتة) . وقد أنشأت التوصيف الجزيئي للIC أن هذه المنطقة تغطي ~100 كيلوبايت التسلسل الجيني ويتكون من هيكل ثنائي (17، 19، 21). حذف الجزء القريب من IC (25-30 كيلوبايت المنبع من المروج SNRPN) النتائج في AS (الشكل 1). في الآونة الأخيرة، وقد ضاقت عنصر التحكم AS يطبع على منطقة 1.15 كيلو بايت [AS أقصر منطقة التداخل (AS-SRO)] (22). ويفترض هذا العنصر أن تشارك في عملية يطبع أن يحدد epigenotype الأم من 15q11-Q13 (23، 24). في PWS، هو الجزء الأعلى من IC التي يتم حذفها. عنصر التحكم يطبع PWS يمتد المروج SNRPN واكسون 1، ويقدر أن يكون> ​​4.3 كيلو بايت في الحجم، على النحو الذي يحدده أقصر منطقة التداخل (PWS-SRO) من microdeletions في الأفراد PWS (25). ويفترض هذا العنصر للعمل في سلالة الجرثومية لتحديد هوية الأب من 15q11-Q13 عن طريق التحول بصمة grandmaternal لبصمة الأب (20، 24، 26). تعمل هذه العناصر يطبع لتنظيم التعبير مطبوع عبر مجال 2-3 ميغابايت. وإن كانت لا تزال غير مفهومة، وقد اقترحت عدة نماذج للدور الذي يمكن أن تقوم به لجنة الاستثمار في عملية يطبع (4، 20، 22 - +28).

الجينات المرشحة لPWS

المنطقة الحرجة PWS تمتد على مدى ما يقرب من نصف 15q11-Q13 ويحتوي على العديد من الجينات التي أعرب عنها أبويا. حتى الآن، ثلاث البروتين الترميز الجينات، صغيرة بروتين نووي ريبوزي النووي N (SNRPN) وشريكتها bicistronic SNRPN المنبع إطار القراءة (SNURF)، necdin (NDN) والبروتين إصبع الزنك (ZNF127)، وخمس وحدات النسخ أعرب أبويا، ZNF127AS، PAR5، PARSN، IPW وPAR1، تم تعيينها إلى هذا الفاصل الزمني (الشكل 1) (5، 10، 29، 30، 31). وبالإضافة إلى ذلك، فقد تم ترجمة العديد من SNRPN الإكسونات المنبع أعرب أبويا لهذه المنطقة وتقسم في توليفات مختلفة لإنتاج النصوص IC (5، 10، 20، 29). homologs الفئران من هذه الجينات النصوص [Zfp127، Zfp127as، ان.دي.ان، Snurf-Snrpn وIPW] خريطة للمنطقة syntenic من كروموسوم الماوس المركزي 7 (5، 31، 32، 33).
منذ المنطقة الحرجة PWS كبيرة ولذلك فمن المرجح أن أكثر من واحد الجينات أعرب أبويا تشارك في patho-نشأة PWS. ومع ذلك، فإنه من غير المؤكد أي من هذه الجينات هو المشاركة كما وصفت أية طفرة داخل الجين يؤثر على التعبير عن واحد فقط PWS الجين (الجدول 1 لم المترابطة) وفقدان تعبير عن واحد الجينات مرشح معين مع PWS. في الواقع، في هذه الحالة الأخيرة البيانات ومتضاربة. بعض المرضى PWS مع نقل المواقع متوازن نادرة تظهر فقدان تعبير عن مجموعة فرعية من الجينات وأعرب أبويا والبعض الآخر يحمل التعبير مطبوع العادي من نفس هذه الجينات (34، 35، 36، 37). تحديد الزوار من البروتين الرواية الواردة في حدود جزء 5'من الجين SNRPN قد تساعد على تفسير هذه البيانات (31). في اثنين من المرضى النبات الأربعة المذكورة أعلاه إلى exons ترميز البروتين الرواية، ووصف SNURF (SNRPN إطار القراءة المنبع)، قطعت بينما تبقى الإكسونات SNRPN سليمة (35، 37). تمت إعادة تسمية هذا الموضع SNURF-SNRPN لتصوير شاذة، والطبيعة bicistronic من هذا الجين (أي واحد نسخة SNURF-SNRPN مرنا من خلالها يتم تحويل البروتينات SNURF واس ام). وأعرب عن SNURF-SNRPN من أليل الأب، وما شابه لم يتم الكشف عن بروتين SMN، SNURF في المرضى الذين يعانون PWS. ومن المثير للاهتمام، وترد إلى exons SNURF تماما مع 4.3 كيلوبايت PWS-SRO، مما يشير إلى دور هام للSNURF في نشأة PWS. هذا البروتين ليس هو العامل الوحيد المسؤول عن PWS، ومع ذلك، منذ انقطاع 15q11-Q13 في المرضى الآخرين النبات يحدث المصب من مكان SNURF-SNRPN (34، 36). حاليا، في أحسن الأحوال يمكن وصفها PWS باعتبارها متلازمة الجينات المتجاورة التي تنطوي على العديد من الجينات التي أعرب عنها أبويا. فئرانا معدلة وراثيا تحمل معقدة حذف المستهدفة من مختلف homologs الماوس (انظر أدناه) قد تحدد الجينات التي تلعب دورا في PWS.

الشكل 1
خريطة الجينية البشرية من كروموسوم 15q11-Q13 والمنطقة syntenic في الماوس. (A) المنطقة الصبغية 15q11-Q13 يمتد أكثر من 4 ميغابايت (5، 10، 13). يتم عرض مجموعات النبات توقف (خط متعرج) المرتبطة كروموسوم الحذف 15q11-Q13، وPWS النقدي وAS المناطق (السهام) والعناصر يطبع الأساسية (AS-SRO وPWS-SRO). يشار إلى الكروموسومات الأم والأب. وتظهر الجينات وأعرب عن أليل الأمهات مربعات وردية اللون. يشار إلى أليل أعرب أبويا من قبل صناديق زرقاء. يظهر صامتة، غير أعربت أليل على شكل مربع أسود. الجينات غير مطبوع (أي أعربت من كل الأليلات) هي باللون الأخضر. يطبع من UBE3A، نص الشعور (S) ونسخة العقاقير (AS) والأنسجة محددة. في الدماغ، وأعرب عن UBE3A ونص شعور من أليل الأمهات في حين كتب نص العقاقير في الاتجاه المعاكس من أليل الأب. الأنسجة الأخرى لا تعبر عن نص العقاقير ولكن التعبير عن UBE3A biallelically. لم يتم بعد تحديد حجم النص العقاقير (الضوء الأزرق). ويرد PAR2 داخل الجين UBE3A (10، 41). وأشار الكاذبة HERC2 التي أعربت عنها الدوائر. (B) خريطة وراثية من 7B الماوس كروموسوم (5، 32). يشار إلى نماذج الفئران من PWS (مت UPD) وAS (بات UPD) (السهام) (66). A المنطقة غير مطبوع على النحو المحدد من قبل الحذف من ع موضع يقع في الجزء-سنترو مركب بسيط (متقطع) من كروموسوم 7 (70، 71). لم ترسم على نطاق كبير.

الجينات المرشحة لAS

وعلى النقيض من PWS، ~20٪ من AS وتوقع الحالات أن يكون الطفرات داخل الجين في المفترضة AS الجينات، منذ الحذف، disomy الأب والطفرات يطبع تم استبعاد وجود عيوب الجزيئية الممكنة في هؤلاء المرضى (الجدول 1). وقد تم E6-AP بتحول البروتين يغاز (UBE3A) تورط الجينات بقوة بوصفه AS الجين منذ تم التعرف على الطفرات الجينومية وتوقف قلب في UBE3A في AS المرضى (38، 39، 40). بالإضافة إلى ذلك، يرد بأكمله 120 كيلوبايت تسلسل UBE3A الجيني داخل 250 كيلوبايت المنطقة AS الحرجة (الشكل 1) (41). UBE3A / Ube3a المعارض يطبع الأنسجة محددة مع التعبير الأمهات تفضيلية في المناطق الفرعية من الدماغ في البشر و الفئران (42، 43، 44، 45). وقد تم بحث عدد لا بأس به من AS المرضى من وجود طفرات في UBE3A. وكان 30٪ فقط من المرضى كما هو الحال في هذه الفئة الخسارة من وظيفة الطفرات في UBE3A (46، 47). كان ما تبقى من 70٪ من المرضى لا عيب في التعرف UBE3A. في حين أن هذا قد يفسر خطأ في التشخيص من AS، فمن الممكن أيضا أن الجينات إضافية أو عناصر إسكات في المنطقة AS الحرجة يشاركون في التسبب في AS. مؤخرا، تم الكشف عن محاضر إضافية في هذه المنطقة، بما في ذلك الشعور نسخة 3.5 كيلوبايت الذين مضمن في 3'-UTR من الجينات UBE3A (المروج 48). يتم التعبير عن هذه النسخة تفضيلي من أليل الأمهات في الدماغ. الطفرات في هذا المرشح نص / الجينات يمكن حساب بقية المرضى لا يملكون الطفرات في UBE3A.
بالإضافة إلى نسخة المعنى، كما تم التعرف على محضر العقاقير (48). هذا النص يبدأ ~6.5 كيلوبايت من كودون وقف UBE3A، ويشمل تسلسل المقابلة للنص معنى وهو تتزامن مع النصف 3'من UBE3A. لم يتم بعد تحديد حجم هذه النسخة. في الدماغ، وأعرب عن نص العقاقير في الغالب من أليل الأب. وقد تم اقتراح نموذج المنافسة حيث نسخ من الجين العقاقير من شأنه أن يستبعد الأب أليل معين UBE3A التعبير (4، 48).

جينية تعديل 15q11-Q13

بالإضافة إلى تحديد الجينات المسؤولة عن PWS وAS، ركزت الكثير من الجهد في فهم كيفية هوية الوالدين أنشئت لهذه المنطقة الصبغية. ويعتقد على نطاق واسع أن الآلية التي تحكم يطبع من PWS / AS ومن المرجح مجال لإشراك الوالدين ومن أصل محددة تعديل جينية من الحمض النووي. وقد ركزت الدراسات على تعديلات جينية مثل أليل معين مثيلة الحمض النووي، وتوقيت تكرارها وهيكل لونين. في الواقع، methylationatD15S63 أليل معين (PW71) وD15S9 (ZNF127)، والتي هي القسيم المركزي لSNRPN، وقد استخدمت على نطاق واسع كمؤشر التشخيص من PWS وAS (49، 50، 51). ومع ذلك، فإن مثيلة أليل معين الأب في PW71 هو متغير وليس من الواضح ما هو الدور الذي قد تلعبه في تسمية أليل الأبوية (52، 53). في حين ZNF127 والإنسان والفأر NDN الميثيلي تفاضلي (54، 55)، SNRPN أنماط مثيلة، والتي تم دراستها في معظم التفاصيل، من المرجح أن تكون جزءا هاما من الآلية التي تتحكم يطبع في هذا الموضع. كل من جينات الإنسان والفأر هي hypermeth-ylated على أليل الأمهات غير نشط في المروج واكسون الأول (المقابلة لPWS-SRO) وفي-جزء 3'من الجينات على أليل نشط الأب (18، 32، 52 ، 56 - 59). وهناك أيضا أدلة تشير إلى أن يتم إنشاء هذه الأنماط مثيلة في الأمشاج، مما يمثل تسلسل المرشح لمنح علامة أليلية يطبع (57، 58).
وقد أدى جمعية راسخة بين العناصر التنظيمية ونوكلياز فرط الحساسية للمحققين استخدام تحليلات لونين للبحث عن العناصر التنظيمية. وتمشيا مع أنماط مثيلة لوحظ في جميع أنحاء موضع SNRPN، المروج واكسون 1 (PWS-SRO) والحساسية لnucleases على أليل الأب وتسلسل مزيد من المصب هي نوكلياز شديدة الحساسية على أليل الأمهات (60). في حين أن الأب فرط الحساسية أليل معين قد لا تعكس سوى حالة نشطة transcriptionally من الجين SNRPN، فمن الممكن أيضا أن هذا جزء من IC تسيطر على epigenotype الأب محددة. ومن المثير للاهتمام، وAS-SRO شديد الحساسية لnucleases على أليل الأمهات (60). وهكذا، فإن فرط الحساسية نوكلياز من PWS-SRO وAS-SRO في IC يدعم الاقتراح بأن هذه المناطق تعمل للتوسط في التبديل بين الأب والأم epigenotypes.
SNRPN وPWS / AS عرض المنطقة الخصائص الأخرى التي هي سمة من الجينات مطبوع. العديد من الجينات في المنطقة تؤوي عناصر المتكررة. على سبيل المثال، إنترون الأول من الفأرة والجينات SNRPN الإنسان يحتوي يكرر G الغنية المحفوظة هيكليا (32، 59). كما اقترح لجينات مطبوع أخرى، قد تصاب يكرر في تأسيس يطبع أو الحامض النووي أنماط من هذا الجين (61). بالإضافة إلى ذلك، الإنسان كروموسوم 15 homologs تكرار بشكل غير متزامن وتبدي جمعية تفضيلية خلال المرحلة المتأخرة S من دورة الخلية (62، 63). في الآونة الأخيرة وقد تبين المنطقة التي تشمل PWS-SRO لإسكات النشاط الجيني عند اختباره في نظام ذبابة الفاكهة (64). على الرغم من أن هذه النتيجة لن يكون متسقا مع الأب محددة دور تفعيل المفترضة من PWS-SRO في البشر والفئران، قد تعكس العلاقة بين تسلسل السيطرة يطبع حاسمة وآليات إسكات تسيطر تطويريا (64). بدلا من ذلك، وقد اقترح أن هذه المنطقة تؤوي عنصر الأنسجة محددة لإسكات التعبير في الأنسجة غير العصبية (25).

نماذج من الماوس PWS وAS

الظواهر المعقدة للPWS وAS جنبا إلى جنب مع طبيعة غير عادية ومبتكرة من IC تضفي أهمية في تطوير نماذج الماوس أن ألخص الظواهر / المورثات من المرضى من البشر. ومثل هذه النماذج تسمح بتحديد الجينات المسؤولة عن كل متلازمة، وسوف تساعد أيضا لتوضيح آلية يطبع في هذا الموضع. وقد وصفت أول نماذج الماوس مرشح لPWS وAS قبل Cattanach وآخرون (65، 66). واستخدم الباحثون intercrosses بين الفئران إيواء نقل المواقع لاستخلاص ذرية مع disomy أحد الأبوين لل/ المنطقة AS مثلي PWS في الفئران. بينما تعرض هذه الفئران الصفات المظهرية تدل على المتلازمات، وهما منطقة كبيرة من disomy أحد الأبوين يجعل من الصعب تعيين النمط الظاهري إلى الجينات الفردية.
يانغ وآخرون قد ولدت نموذج الفأر لPWS وIC الطفرات باستخدام إعادة التركيب مثلي في الجذعية الجنينية (ES) الخلايا لهندسة حذف الجينات Snprn والمنطقة الذي يتوافق مع الجزء الأعلى من IC (بما في ذلك PWS- SRO) (67). وكانت الذكور خيالية مع الطفرة في الأليل المستمدة أمهات غير قادرة على عكس epigenotype الأم من أليل متحولة في سلالة الجرثومية، ووعلى هذا النحو، والنسل وراثة هذا الأليل من الذكور خيالية فشلت في التعبير عن الجينات كتب عادة حصرا من الأب أليل (أي Snrpn، Zfp127، ان.دي.ان وIPW). هذه الفئران عرض بعض الظواهر المميزة لPWS. وهكذا، بالإضافة إلى توليد نموذج الفأر من PWS، والطفرات IC هذه الطفرة يقلد الإنسان، مشيرا إلى أن دور المركز وافترض من IC يتم حفظها بين الفئران والبشر. كما تم وصفها A نموذج الفأر الثاني لPWS التي كتبها RD نيكولز وآخرون (اتصال شخصي). في هذا النموذج، أدى إدخال التحوير في حذف كبير من PWS / AS المنطقة المتجانسة والفئران التي ترث الحذف من خصائص العرض الد PWS.
على نموذجين الماوس أعلاه والبيانات من المرضى PWS توفر أدلة دامغة على أن تشارك في الاضطرابات متعددة الجينات وأعرب أبويا في التسبب في PWS. في اتفاق مع هذا الاقتراح، والفئران التي تؤوي والحذف داخل الجين من الجين Snrpn طبيعية ظاهريا (67). وهكذا، اضطرابات في Snrpn التعبير الجيني وحدها ليست كافية لتسبب أعراض PWS في الماوس. لإثبات أن أكثر من جين واحد هو المشاركة، والفئران مع طفرات في جينات متعددة أعرب أبويا يجب أن تكون مشتقة.
كما تم استخدام تكنولوجيا خلايا ES لتوليد الطفرات في اثنين من الجينات المرشحة لAS، Ube3a والوحيدات β 3 من GABA A مستقبلات (Gabrb3). الفئران يعانون من نقص الأمهات من مطبوع عرض Ube3a الجينات النمط الظاهري الذي يحاكي AS، بما في ذلك ضعف المحرك، والمضبوطات محرض وعجز التعلم التي تعتمد على السياق (45). على الرغم من عدم وجود الجين مطبوع التي يعبر حصرا من أليل الأمهات (أي UBE3A) هو الأكثر حظا AS الجينات مرشح، وβ 3 الوحيدات غير مطبوع من GABA يقع A مستقبلات (GABRB3) الجينات في المنطقة الحذف كبيرة من غالبية AS المرضى ويمكن أن تسهم أيضا في النمط الظاهري. الفئران التي تفتقر إلى المضبوطات المعرض Gabrb3 الجينات والتعلم والعجز في الذاكرة، المهارات الحركية الفقيرة وفرط النشاط، والميزات التي هي مشتركة بين AS (68، 69). بالإضافة إلى ذلك، متخالف Gabrb3 فئرانا معدلة وراثيا يحمل النمط الظاهري جزئي، مما يوحي بأن haploinsufficiency من الجين GABRB3 يمكن أن يكون عاملا مساعدا في المرضى الذين يعانون AS الحذف. كما هو الحال مع نماذج الماوس PWS والفئران إضافي مع الطفرات في كل Ube3a وGabrb3 مطلوبة لتحديد المساهمة النسبية لهذه الجينات إلى التعبير الكامل عن AS.

النتائج

وخلال العام الماضي، العديد من المساهمات البحثية المتقدمة فهمنا من التسبب في PWS وAS. قدم تحديد الجين HERC2 والخادعة شرح الجزيئي لل15q11-Q13 كونه بؤرة لإعادة التركيب، وبالتالي توليد واحدة من الحذف الخلالي الأكثر شيوعا لدى البشر. يفسر عدم الخادعة أيضا لماذا لم يلاحظ نفس عدم الاستقرار الكروموسومات في الماوس. إن نظرة خاطفة على الخرائط الوراثية تكشف عن ندرة الجينات / محاضر في الماوس بالمقارنة مع البشر. ويمكن الاطلاع على الرواية بالمعنى والعقاقير Ube3a محاضر في الماوس؟ كما سيتم تحديدها homologs الوحدات النسخ Parsn، Par5 وPar1؟ أكثر لهذه النقطة، إذا كان IC يحتوي على المعلومات التي تمنح علامة يطبع الأولية، وتسلسل الهوية بين البشر والفئران أن كشف على المستوى الجيني؟ في حين الحفاظ على التسلسل هو بالتأكيد فكرة جذابة، لم يتم حتى الآن تحديد العناصر التي لم رابطة الدول المستقلة الحفظ -acting في الجينات مطبوع أخرى. توليد الطفرات الفئران التي تحاكي يطبع طفرات في البشر يوحي الحفاظ الوظيفي للIC. سيتم الحفاظ على الإكسونات Snrpn المنبع التي تشكل النصوص IC في الماوس؟ بدلا من ذلك، لا النسخ المجهولين تلعب دورا في تحديد هوية الوالدين؟ قد تساعد الدراسات فرط الحساسية نوكلياز لتحديد ما إذا كان هيكل لونين الأساسي مشابه في الماوس. مع ظهور الفئران PWS وAS النماذج، ويمكن معالجة هذه المسائل، وتوفير فهم أعمق للآلية الجزيئية المعقدة التي يحكم PWS وAS مطبوع التعبير الجيني.
  • © 1999 مطبعة جامعة أكسفورد
المراجع

    • بارلو DP
    المنافسة عزر المشترك لآلية يطبع EMBOJ 1997؛ 16:.. 6899-6905.
    الملخص / الحرة النص الكامل
    • بارتولومي MS،
    • تيلغمان SM
    يطبع الجينومية في الثدييات. أنو. القس جينيه 1997؛ 31: 493-525.
    CROSSREF ميدلاين ويب للعلوم الباحث العلمي من Google
    • كونستانسيا M.،
    • بيكارد B.،
    • كيلسي G.،
    • ريك W.
    آليات يطبع. الجينوم الدقة 1998؛ 8: 881-900.
    شبكة العلوم جوجل الباحث العلمي
    • برانان CI،
    • بارتولومي MS
    آليات يطبع الجينومية. داء. أوبان. جينيه. ديف 1999؛ 9: 164-170.
    CROSSREF ميدلاين ويب للعلوم الباحث العلمي من Google
    • نيكولز RD،
    • Saitoh S.،
    • Horsthemke B.
    يطبع في برادر ويلي والمتلازمات Angelman اتجاهات جينيه عام 1998؛ 14: 194-200..
    CROSSREF ميدلاين ويب للعلوم الباحث العلمي من Google
    • جيانغ Y.-H.،
    • تساي T.-F.،
    • Bressler J.،
    • Beaudet AL
    يطبع في Angelman والمتلازمات-برادر ويلي. داء. أوبان. جينيه. ديف 1998؛ 8: 334-342.
    CROSSREF ميدلاين ويب للعلوم الباحث العلمي من Google
    • كلايتون سميث J.،
    • Pembrey ME
    متلازمة أنجلمان. J. ميد. جينيه عام 1992؛ 29: 412-415.
    مجانا النص الكامل
    • كاسيدي SB
    متلازمة برادر ويلي. J. ميد. جينيه 1997؛ 34: 917-923.
    الملخص / الحرة النص الكامل
    • كريستيان SL،
    • روبنسون WP،
    • هوانغ B.،
    • Mutirangura A.،
    • خط MR،
    • ناكاو M.،
    • Surti U.،
    • Chakravarti A.،
    • يدبيتر DH
    التوصيف الجزيئي للمنطقتين حذف نقطة الداني في كل من برادر ويلي ومرضى متلازمة أنجلمان. آم. J. هوم. جينيه 1995؛ 57: 40-48.
    ميدلاين ويب للعلوم الباحث العلمي من Google
    • كريستيان SL،
    • بهات NK،
    • مارتن SA،
    • ساتكليف JS،
    • كوبوتا T.،
    • هوانغ B.،
    • Mutirangura A.،
    • Chinault AC،
    • Beaudet AL،
    • يدبيتر DH
    YAC المتكاملة خريطة contig للويلي برادر / المنطقة Angelman على الصبغي 15q11-13 مع متوسط ​​STS المباعدة بين 35 كيلوبايت بحوث الجينوم 1998؛ 8: 146-157..
    الملخص / الحرة النص الكامل
    • Kuwano A.،
    • Mutirangura A.،
    • ديتريتش B.،
    • Buiting K.،
    • Horsthemke B.،
    • Saitoh S.،
    • Niikawa N.،
    • يدبيتر SA،
    • غرينبرغ F.،
    • Chinault AC،
    • يدبيتر DH
    تشريح الجزيئي للبرادر ويلي / Angelman المنطقة متلازمة (15q11-13) من خلال YAC الاستنساخ وتحليل FISH. همهمة. مول. جينيه 1992؛ 1: 417-425.
    الملخص / الحرة النص الكامل
    • Buiting K.،
    • Groβ S.،
    • جي Y.،
    • Senger G.،
    • نيكولز RD،
    • Horsthemke B.
    نسخ المعلنة للMN7 (D15F37) خريطة الجينات الأسرة على مقربة من نقاط التوقف حذف مشتركة في برادر ويلي / المتلازمات Angelman. Cytogenet. خلية جينيه عام 1998؛ 81: 247-253.
    CROSSREF ميدلاين ويب للعلوم الباحث العلمي من Google
    • جي Y.،
    • Walkowica MJ،
    • Buiting K.،
    • جونسون D.،
    • Tarvin RE،
    • Rinchik EM،
    • Horsthemke B.،
    • ستابس L.،
    • نيكولز RD
    الجين الأجداد للكتب،-نسخة منخفضة يكرر في برادر-فيلي / المنطقة Angelman يشفر بروتين كبير المتورطين في الاتجار البروتين، والتي تعاني من عجز في الفئران مع العصبية والعضلية وتشوهات spermiogenic. همهمة. مول. جينيه 1999؛ 8: 533-542.
    الملخص / الحرة النص الكامل
    • Carrozzo R.،
    • روسي E.،
    • كريستيان SL،
    • Kittikamron K.،
    • Livieri C.،
    • Corrias A.،
    • بوتشي L.،
    • FOIS A.،
    • سيمي P.،
    • بوثيو L.،
    • بيكاريا L.،
    • Zuffardi O.،
    • يدبيتر DH
    المشترك بين وإعادة ترتيب الصبغي كلاهما يشارك في أصل الحذف 15q11-Q13 في متلازمة برادر ويلي Am.J.Hum.Genet 1997؛ 61: 228-231..
    ميدلاين ويب للعلوم الباحث العلمي من Google
    • روبنسون WP،
    • Dutly F.،
    • نيكولز RD،
    • برناسكوني F.،
    • Penaherrera M.،
    • ميخاليس RC،
    • Abeliovich D.،
    • Schinzel AA
    آليات تشارك في تشكيل الحذف والتكرار في 15q11-Q13. J. ميد. جينيه عام 1998؛ 35: 130-136.
    الملخص / الحرة النص الكامل
    • ليمان AL،
    • ناكاتسو Y.،
    • تشينغ A.،
    • برونسون RT،
    • Oakey RJ،
    • كيبر-Hrynko N.،
    • الاصبع JN،
    • دورهام بيير D.،
    • هورتون DB،
    • نيوتن JM،
    • ليون MF،
    • الرائعة MH
    بروتين كبير جدا مع الزخارف الفنية المتنوعة هو نقص في RJS (runty، متشنج، معقمة) الفئران. بروك. Natl أكاد. الخيال العلمي. الولايات المتحدة الأمريكية عام 1998؛ 95: 9436-9441.
    الملخص / الحرة النص الكامل
    • ريس A.،
    • ديتريتش B.،
    • Greger V.،
    • Buiting K.،
    • لند M.،
    • Gillessen-Kaesbach G.،
    • Anvret M.،
    • Horsthemke B.
    يطبع الطفرات التي اقترحتها غير طبيعية أنماط الحامض النووي في عائلي Angelman والمتلازمات-برادر ويلي. آم. J. هوم. جينيه 1994؛ 54: 741-747.
    ميدلاين ويب للعلوم الباحث العلمي من Google
    • ساتكليف JS،
    • ناكاو M.،
    • كريستيان S.،
    • Orstavik KH،
    • Tommerup N.،
    • يدبيتر DH،
    • Beaudet AL
    الحذف من جزيرة الدليل السياسي الشامل مميثل تفاضلي في الجين SNRPN تحدد منطقة السيطرة يطبع المفترضة الطبيعة جينيه 1994؛ 8:. 52-58.
    CROSSREF ميدلاين ويب للعلوم الباحث العلمي من Google
    • Buiting K.،
    • Saitoh S.،
    • الإجمالي S.،
    • ديتريتش B.،
    • شوارتز S.،
    • نيكولز RD،
    • Horsthemke B.
    microdeletions الموروثة في Angelman والمتلازمات برادر ويلي تعريف مركز يطبع على الكروموسوم البشري 15 طبيعة جينيه 1995؛ 9:. 395-400.
    CROSSREF ميدلاين ويب للعلوم الباحث العلمي من Google
    • ديتريتش B.،
    • Buiting K.،
    • كورن B.،
    • ريكارد S.،
    • باكستون J.،
    • Saitoh S.،
    • نيكولز RD،
    • Poustka A.،
    • Winterpacht A.،
    • تسابل B.،
    • Horsthemke B.
    التبديل بصمة على الكروموسوم البشري 15 قد تنطوي على نصوص بديلة من الجين SNRPN الطبيعة جينيه 1996؛ 14:. 163-170.
    CROSSREF ميدلاين ويب للعلوم الباحث العلمي من Google
    • Saitoh S.،
    • Buiting K.،
    • روغان PK،
    • باكستون JL،
    • دريسكول DJ،
    • Arnemann J.،
    • كونيغ R.،
    • مالكولم S.،
    • Horsthemke B.،
    • نيكولز RD
    تعريف الحد الأدنى من مركز يطبع والتثبيت من كروموسوم 15q11-Q13 epigenotype التي يطبع الطفرات. بروك. Natl أكاد. الخيال العلمي. الولايات المتحدة الأمريكية عام 1996؛ 93: 7811-7815.
    الملخص / الحرة النص الكامل
    • أوتا T.،
    • Buiting K.،
    • Kokkonen H.،
    • MCCANDLESS S.،
    • هيجر S.،
    • Leisti H.،
    • دريسكول DJ،
    • كاسيدي SB،
    • Horsthemke B.،
    • نيكولز RD
    الآلية الجزيئية من متلازمة أنجلمان في اثنين من العائلات الكبيرة تنطوي على طفرة يطبع. آم. J. هوم. جينيه 1999؛ 64: 385-396.
    CROSSREF ميدلاين ويب للعلوم الباحث العلمي من Google
    • برغر J.،
    • Buiting K.،
    • ديتريتش B.،
    • Groβ S.،
    • ليش C.،
    • سبيرلنغ K.،
    • Horsthemke B.،
    • ريس A.
    آليات ومخاطر تكرار ofimprinting عيوب في متلازمة أنجلمان مختلفة Am.J.Hum.Genet 1997؛ 61: 88-93..
    CROSSREF ميدلاين ويب للعلوم الباحث العلمي من Google
    • Buiting K.،
    • ديتريتش B.،
    • Groβ S.،
    • ليش C.،
    • فاربر C.،
    • بوتشولز T.،
    • سميث E.،
    • ريس A.،
    • برغر J.،
    • Nothen MM،
    • بارت-ويت U.،
    • يانسن B.،
    • Abeliovich D.،
    • ليرر I.،
    • فان دن Ouweland A.،
    • هالي DJJ،
    • Schrander-Stumpel C.،
    • سميتس H.،
    • Meinecke P.،
    • مالكولم S.،
    • غاردنر S.،
    • لند M.،
    • نيكولز RD،
    • صديق K.،
    • شولز A.،
    • ماتيس G.،
    • Kokkonen H.،
    • هيلبرت P.،
    • Maldergem LV،
    • غلوفر G.،
    • كاربونيل P.،
    • ويليمز P.،
    • Gillessen-Kaesbach G.،
    • Horsthemke B.
    عيوب يطبع متفرقة في متلازمة برادر ويلي ومتلازمة أنجلمان: الآثار المترتبة على نماذج بصمة التبديل، وتقديم المشورة الوراثية، والتشخيص قبل الولادة AM. J. هوم. جينيه عام 1998؛ 63: 170-180.
    CROSSREF ميدلاين ويب للعلوم الباحث العلمي من Google
    • أوتا T.،
    • الرمادي TA،
    • روغان PK،
    • Buiting K.،
    • غابرييل JM،
    • Saitoh S.،
    • موراليدار B.،
    • Bilienska B.،
    • Krajewska-Walasek M.،
    • دريسكول DJ،
    • Horsthemke B.،
    • بتلر MG،
    • نيكولز RD
    آلية يطبع-طفرة في متلازمة برادر ويلي. آم. J. هوم. جينيه 1999؛ 64: 397-413.
    CROSSREF ميدلاين ويب للعلوم الباحث العلمي من Google
    • فيرغسون سميث AC
    يطبع ينتقل إلى مركز الطبيعة جينيه 1996؛ 14: 11

 

__________________
استشارى الادوية الطبيعيه وباحث وخبير فى علاجات التوحد
رد مع اقتباس
  #12  
قديم 10-20-2015, 12:42 AM
رافت ابراهيم رافت ابراهيم غير متواجد حالياً
عضو ذهبي
 
تاريخ التسجيل: Dec 2011
المشاركات: 520
افتراضي العكس الجينوم البشري من كروموسوم 15q11-Q13 في أمهات مرضى متلازمة أنجلمان مع الدرجة الثانية (BP2 / 3) الحذف

 

http://hmg.oxfordjournals.org/content/12/8/849.full

https://translate.googleusercontent....LiWWQSf3fqt94w




وقد تم مؤخرا أظهرت الوالدين العكس الجينومية دون المجهرية أن يكون حاضرا في العديد من الاضطرابات الجينوم. هذه ظاهرة الانقلاب هي الأشكال الجينومية التي تسهل اختلال وإعادة التركيب غير طبيعي بين الازدواجية قطعي المرافقة. ويرتبط؛ (MIM 105830 AS) مع تشوهات معينة من كروموسوم 15q11-Q13، مع حوالي 70٪ من الحالات يجري الأم من أصل 4 ميجا بايت الحذف متلازمة أنجلمان. نقدم هنا دليل على أن بعض أمهات AS المرضى الذين يعانون من الحذف في المنطقة 15q11-Q13 لها انعكاس متخالف التي تنطوي على المنطقة التي يتم حذفها في النسل المتضررين. تم الكشف عن انعكاس في أمهات أربعة من ستة AS الحالات مع نقطة توقف 2-3 (BP2 / 3) 15q11-Q13 الحذف، ولكن ليس في سبع أمهات AS بسبب disomy أحد الأبوين الأب (UPD) 15. لقد حددنا متغير نقاط التوقف انقلاب داخل BP الازدواجية قطعي في مقلوب AS الأمهات، وكذلك في المرضى كما حذف. ومن المثير للاهتمام، هو مقلوب المنطقة BP2-BP3 في مشروع الماوس تسلسل الجينوم فيما يتعلق بمشروع التسلسل البشري. تم اكتشاف BP2-BP3 كروموسوم 15q11-Q13 انقلاب في أربعة من 44 شخصا (9٪) من السكان عام (P <0.004). يجب أن يكون انعكاس BP2 / 3 عقار المتوسطة التي تسهل وقوع 15q11-Q13 BP2 / 3 الحذف في النسل.
مقدمة

وقد ركزت الازدواجية قطعي الاهتمام البحوث المكثفة حول آليات تحور الجينوم البشري ودور الازدواجية في تطور الرئيسيات (1). أكثر من 30 الأمراض التي تصيب الإنسان، التي أطلق عليها أسم اضطرابات الجينوم (2)، هي نتيجة لإعادة ترتيب الجينوم داخل الازدواجية قطعي (2، 3). وقد أثبتت العديد من الدراسات أن الازدواجية قطعي يقع عن كثب هي واحدة من العوامل المؤهبة لحدوث اضطرابات الجينوم. نحن نفترض أنه، على الأقل بالنسبة لبعض الأنواع من إعادة ترتيب، والعامل الثاني المهيئة لإعادة ترتيب هو وجود ظاهرة الانقلاب متخالف في منطقة محددة من الازدواجية قطعي. وهذه ظاهرة الانقلاب، والتي هي غير مرئي بالمجهر نظرا لقربه من الازدواجية المجزأ، تتداخل مع نقاط الاشتباك العصبي مثلي العادية، وسوف تجعل اختلال وإعادة التركيب غير طبيعي على الأرجح، تماما كما هو الحال بالنسبة العكس تعريفية cytogenetically. وصفناها في الآونة الأخيرة أن بعض من جديد إعادة ترتيب الكروموسومات المتكررة، التي تنطوي على كروموسوم 8 أو كليهما الكروموسومات 4 و 8، هي المنتجات المؤتلف من العكس متخالف دون المجهرية موجودة في الأصل تحيل كروموسوم المتعلقة المرض (4، 5). على العكس لها نفس نقاط التوقف لإعادة ترتيب المتكررة ويحيط بها الازدواجية قطعي paralogous. وعلاوة على ذلك، كانت موجودة في نسبة كبيرة من موضوعات عامة السكان، وبالتالي يمكن اعتبار الأشكال الجينومية، التي تشارك في حدوث إعادة ترتيب الأمراض المرتبطة. آخر انقلاب خفي من 1.5 ميجا بايت على الصبغي 7q11.23 تم العثور في أربع من 12 آباء المرضى الذين يعانون من متلازمة وليامز-بيرون (WBS) (6). وتشير هذه النتائج إلى أن الأشكال الجينومية قد يكون سمة مشتركة في بعض المناطق غير المستقرة المرتبطة اضطرابات الجينوم. لاختبار هذه الفرضية درسنا كروموسوم المنطقة 15q11-Q13 في أمهات Angelman متلازمة 15q11-Q13 المرضى حذفها.
يبدو البشري كروموسوم 15q11-Q13 ترتيبها في العديد من الاضطرابات. متلازمة برادر ويلي (PWS؛ MIM 176270) ومتلازمة أنجلمان (AS؛ MIM 105830) هي الاضطرابات العصبية السلوكية التي تحدث على تردد 000 1/10 إلى 1/20 000 ولادة حية (7). حوالي 70٪ من PWS وAS المرضى الذين لديهم الحذف كروموسوم 15q11-Q13 من أصل الأب والأم، على التوالي (8). الأكثر PWS / AS تتجمع الحذف على اثنين من نقاط التوقف القريبة (BP1 وBP2، الدرجة الأولى والدرجة الثانية المرضى، على التوالي)، وتوقف البعيدة المشتركة (BP3) (9). وتقع الكبيرة (~400 كيلوبايت) الازدواجية قطعي الهوية تسلسل عالية (> 90٪) في هذه نقاط التوقف (10، 11). وقد كشفت الدراسات التطورية أن هذه الازدواجية قطعي ظهرت منذ ~20 مليون سنة (10)، لذلك من ظهور عائلة قردة عليا (12). الازدواجية قطعي إضافية ومشتركة جزئيا موجودة في نسخ متعددة على 15q11-Q14 (13). على الرغم من التقدم في توصيف هذه الازدواجية المجزأ، الآلية الجزيئية وعوامل القابلية المحتملة التي يمكن أن تكمن وراء PWS / AS الحذف لا تزال مجهولة. على سبيل المثال، BP1 / BP2 وBP3 15q11-Q13 المرافقة الازدواجية قطعي يبدو أن تقع في التوجه المقلوب، الذي من شأنه أن يؤدي من خلال الصبغي معبر المبالغ إلى paracentric العكس ولكن ليس الحذف. مع هذا التوجه المقلوب، وآليات أخرى مثل الصبغي سيطة الجذعية حلقة وقد اقترحت (10). هنا، علينا أن نظهر أن نسبة كبيرة من الأمهات من AS المرضى الذين يعانون من الحذف BP2 / 3 تحمل انعكاس لهذه المنطقة. وينبغي أن يكون وجود انعكاس عقار المتوسطة التي تسهل وقوع BP2 / 3 الحذف في النسل.

النتائج

انقلاب 15q11-Q13 في أمهات AS المرضى الذين يعانون من BP2 / 3 الحذف

من خلال تحقيقات مختلفة تقع في 15q11-Q13 وفقا لمحتواها من علامات والجينات من المنطقة (14) (الشكل 1 A)، وقد عرفت حذف 15q11-Q13 من الطبقة الأولى (BP1 / 3) في اثنين AS المرضى وكما الدرجة الثانية (BP2 / 3) في ستة AS المرضى. وأظهرت الطورية والطور البيني FISH التجارب أن أربعة من ست أمهات (عينات 1-4 في الجدول 1) من AS المرضى الذين يعانون من الحذف BP2 / 3 كان لها انعكاس متخالف المنطقة 15q11-Q13، الذي يتم حذف في ذريتهم (الشكل 2 ). ومع ذلك، كان أيا من أمهات سبع حالات AS تظهر isodisomy الأب (UPD) 15، ولا أمهات اثنين من المرضى الذين يعانون من BP1 / 3 الحذف انعكاس 15q11-Q13 (عينات 15/07 في الجدول 1). ومن المثير للاهتمام، وكانت أربع من 44 موضوعات لا علاقة لها من عموم السكان متخالف للقلب، مما تردد من 4.5٪ من الكروموسومات مقلوب في عموم السكان. وهذا يؤدي إلى اختلاف كبير في وتيرة انقلاب في AS أمهات المرضى BP2 / 3 الحذف، بالمقارنة مع موضوعات من عموم السكان (P <0.004؛ OR = 20.00، 95٪ CI 2،75-145،5).

الشكل 1. (A) خريطة الجينوم المنطقة 15q11-Q13، ترتيبها في PWS وAS المرضى واضطرابات البشرية الأخرى. I (BP1) والدرجة الثانية كما تظهر نقاط التوقف BP1-BP3 المشاركين في فئة (BP2) PWS / أنواع الحذف. وأشار أيضا نقاط التوقف الأخرى (BP4، BP5 وBP). موقع تحقيقات تستخدم لFISH (استنساخ RP11 BAC) وPFGE (تحقيقات 1-4، انظر المواد وطرق) وترد التحليل. المسافات بين الازدواجية قطعي، لا يتم تحجيم نقطة أساس و علامات. يتم وضع علامة على تسلسل LCR15 التي كتبها المستطيلات الصفراء (GLP، golgin مثل البروتين، X عدد ممكن من النسخ) وHERC2 الازدواجية قطعي ذات الصلة ب التي كتبها المستطيلات الخضراء. (B) GenomePixelizer عرض النتائج داخل الصبغي BLAST من منطقة كروموسوم 15q11-Q13 (الهوية تسلسل الأحمر = 100٪، الأرجواني 95-99٪، 90-94٪ الخضراء). المراسلات بين المواقع في لوحة تقريبية فقط. السهام الملونة تشير إلى مناطق هوية تسلسل والتوجيه بين الازدواجية قطعي في بناء 30. ونفس اللون من السهام يشير الازدواجية القطاعية التي ترتبط مع بعضها البعض. الازدواجية قطعي أخرى في المنطقة، التي لا علاقة لها PWS / AS لا تظهر الحذف.


الشكل 2. تحديد انعكاس 15q11-Q13 في أمهات AS المرضى الذين يعانون من الحذف BP2 / 3. النتائج FISH تهجين على الطورية (A) والطور البيني (B) الكروموسومات من أمهات AS المرضى الذين يعانون من BP2 / 3 الحذف مع (A1، B1) ودون (A2، B2) انعكاس 15q11-Q13. في (A) تحقيقات RP11-494F2 (الخضراء) وRP11-322N14 (الحمراء)، في طرفي المنطقة BP2-BP3، استخدمت. في (B) تحقيقات RP11-494F2 (الأخضر)، RP11-131I21 (الحمراء)، داخل المنطقة BP2-BP3 الداني، وRP11-25C1 (الصفراء)، بين BP1 وBP2، استخدمت. السهام البيضاء تدل على كروموسوم مقلوب.


الجدول 1.
نتائج التجارب FISH في الخلايا الطورية والطور البيني من أمهات مرضى متلازمة أنجلمان

مجموعة من الازدواجية قطعي في المنطقة 15q11-Q13

لقد قمنا على BLASTN (15 التحليل) في المنطقة 15q11-Q14 ضد نفسها لتحديد طول وتوجه الازدواجية قطعي. أكدنا وجود الازدواجية الرئيسية الثلاث قطعي (BP1، BP2 وBP3)، وكذلك الكشف عن مجموعتين إضافية (BP4 وBP5)، كما ذكرت سابقا (10، 11، 13) (الشكل 1 B). أحدث التجمع (بناء 30) من مشروع تسلسل الجينوم البشري المقابلة لهذه المنطقة يعطي حجم بين BP1 وBP3 من ~4.8 ميغابايت، ويظهر التوجه جنبا إلى جنب من BP2 فيما يتعلق BP3. أن هذا التوجه غير صحيحة استنادا إلى تحليل مفصل لاستنساخ المسيحية وآخرون. (10) وعاموس-Landgraf وآخرون (11)، على الرغم من تعدد الأشكال الازدواجية قطعي ويمكن أيضا موجودة تتغير توجهات هذه القطاعات. ويحيط المنطقة التي تحتوي على قطعي الازدواجية BP3 ثغرات في الجمعية بناء 30 وأنه أقصر بكثير مقارنة مع الخريطة الفعلية التي تم بناؤها باستخدام الحيوانات المستنسخة YAC (14).

تحديد 15q11-Q13 قلب وحذف نقاط التوقف

لمزيد من تميز المنطقة 15q11-Q13 تشارك في قلب والحذف، أجرينا الكهربائي النبضي (PFGE) تحليل عينات من AS الأمهات مع وبدون انقلاب BP2-BP3، AS المرضى BP2 / 3 و BP1 / 3 حذفها، والموضوعات من عموم السكان.
أولا، من خلال التحقيق 1، وتقع بالقرب من علامة D15S542 (على الطرف القريب من BP2)، ونحن الكشف عن المحتملة الداني توقف حذف اثنين من الدرجة الثانية المرضى (من ثلاثة تحليلها) باستخدام ثلاثة انزيمات تقييد مختلفة في حالة واحدة، مما أعطى إضافية شظايا من ~0.6 ميجا بايت ليس أنا، ~1.7 ميغابايت ناورو الأول و~0.7 ميغابايت ساجيتاريوس منظمة العفو الدولية، ومع إضافي ~1.5 ميغابايت MLU I تفتيت في الصف الثاني مريض آخر (الشكل 3). لذلك، إذا كشف هذا التحقيق الطبقة II نقاط، ومن ثم ينبغي أن تكشف أيضا عن انعكاس الجيني BP2-BP3 في أمهات AS الدرجة الثانية المرضى. وهكذا، التحقيق 1 أعطى العصابات إضافية في ثلاثة BP2-BP3 أمهات مختلفة مقلوب: ~1.8 ميغابايت MLU أنا في عينة LB327، ثلاثة ناورو مختلفة I خارج نطاقات (~1.0، 1.5 و 1.7 ميغابايت) في عينة LB325، و~1.6 ميجا بايت ناورو I الفرقة إضافية في عينة LB320. كما استبعدت إمكانية ناورو I الهضم الجزئي عن طريق التهجين نفس تصفية مع تحقيقات أخرى مصممة في هذه الدراسة.

الشكل 3. حقل النبض الكهربائي للهلام (PFGE) نتيجة لتحقيقات تقع في نهايات المنطقة مقلوب 15q11-13. تحقيقات 1 و 2 وتقع قريب وبشكل أقصى للازدواجية BP2 قطعي، على التوالي. تحقيقات 3 و 4 تقع قريب وبشكل أقصى للازدواجية BP3 قطعي، على التوالي (تكوين غير مقلوب كروموسوم). الجرد مو، أم مقلوب؛ LB، عدد العينة. غير الجرد مو، غير مقلوب الأم. الدرجة الثانية، AS BP2 / 3 عينات حذف؛ جنرال البوب، عينة السكان العامة. بات، المريض. يتم وضع علامة على نقاط التوقف قلب (نطاقات إضافية محددة من الأمهات مقلوب) من خلال الأسهم، ونقاط التوقف الحذف (نطاقات إضافية محددة من الدرجة الثانية مرضى) نجمية. نطاقات متعددة الأشكال الأخرى التي تظهر لدى الأمهات مقلوب وغير مقلوب، لم يتم وضع علامة الدرجة الثانية أو عينات من عموم السكان. من النوع البري أنماط تقييد تتوافق مع الممرات دون السهام، والعلامات النجمية أو عصابات متعددة الأشكال الإضافية المذكورة في النص.

تم الكشف عن شظايا نقطة توقف أيضا مع ثلاثة تحقيقات إضافية المرافقة المنطقة مقلوب، وتقع في النهاية البعيدة من BP2 وعند النهايات القريبة والبعيدة من BP3. التعرف على مختلف أجزاء إضافية باستخدام أنزيمات التقييد مختلفة في نفس العينات وينبغي أن تبين وجود إعادة ترتيب الجينوم بدلا من مجرد الأشكال موقع قيود. مسبار 2، وتقع على مقربة من علامة D15S543، بالكشف عن أجزاء إضافية مختلفة مع العديد من الانزيمات التقييد في اثنتين من الأمهات مقلوب: إضافي ~2 ميغابايت ناورو الأول و> 2 ميجا بايت ليس أنا شظايا تم تحديدها في عينة LB325، و~1.8 ميجا بايت ليس أنا جزء إضافي في عينة LB327. التحقيق 3، وتقع في الجانب القريب من BP3 الكشف عن إضافي ~1.5 ميغابايت ساجيتاريوس AI جزء في العينة LB327 مقلوب. ومن المثير للاهتمام، تحقيقات 3 و 4 الكشف عن شظايا متعددة الأشكال الأخرى في عينات من عموم السكان أو في أمهات اختبار (مقلوب وغير مقلوب)، مما يؤكد مدى تعقيد المنطقة 15q11-Q13. وهكذا، التحقيق 2 الكشف عن ~0.3 ميغابايت ناورو أنا جزء في العينة LB327 (ينظر أيضا في أمهات غير مقلوب، لا يظهر)، وتحقيقات 3 و 4 الكشف عن شظايا متعددة الأشكال من ~0.4 و~0.6 ميغابايت مع أنظمة دعم الأعمال التجارية HII في المواد من عموم السكان، على التوالي (الشكل 3).

هو مقلوب المنطقة كروموسوم BP2-BP3 15q11-Q13 أيضا في تسلسل جينوم الفأر

لقد محاذاة تسلسل العام البشري 15q11-Q13 مع المنطقة syntenic من كروموسوم الماوس 7. وكشفت هذه المواءمة أن المنطقة BP2-BP3 هو مقلوب أيضا في تسلسل الماوس فيما يتعلق التسلسل البشري (الشكل 4). تم الكشف عن هذا انعكاس أيضا باستخدام بيانات تسلسل الماوس من سيليرا (لا تظهر البيانات). على الرغم من أن هذه المناطق لا تزال تحتاج إلى مزيد من تسلسل وتجميع، حدود انعكاس تنسجم تماما مع المواقع HERC2 جين كاذب، الموافق BP الازدواجية قطعي. كما هو متوقع، والجينات وتسلسل الموسومة المواقع (STS) النظام في الإشعاع الماوس خريطة الهجين دعم البيانات من تسلسل تجميعها ومن ثم التوجه المقلوب في هذه المنطقة فيما يتعلق التسلسل البشري. وهكذا، يبدو أن كتلة الجين P-Gabrg3-Gabra5-Ube3a-Snprn-NDN-Magel2 مقلوب عند مقارنتها الخريطة الإنسان، ولكن ليس فيما يتعلق المرافقة الجينات، مثل Chrna7 (البعيدة) وMGC35570 (القريبة)، والجينات الموجودة القاصي أو الداني لهؤلاء الصغار، على التوالي. على الرغم من أن تسلسل متاح في المنطقة القريبة لا يزال غير مكتمل، والمواءمة بين الفأر والإنسان تبين أن انعكاس لا يشمل المنطقة BP1-BP2. ومن المثير للاهتمام، وتغيير ترتيب الشرائح BP3-BP4 وBP4-BP5 في المنطقة syntenic الماوس. يقع التسلسل الماوس BP3-BP4 البعيدة في المنطقة BP4-BP5، التي هي على تماس إلى BP2-BP3 (الشكل 4). حدود هذه إعادة ترتيب ترتبط مع موقف نقطة أساس و مجموعات من انخفاض نسخة تكرار تسلسل 15 (LCR15s) المرتبطة جزئيا إلى الازدواجية BP قطعي (13).

الرقم 4. نقطة مؤامرة المواءمة بين الكروموسوم البشري 15 (HSA15)، والمنطقة 15q11-Q13 (18-28 ميجا بايت، وبناء 30)، ونظيره syntenic على الماوس كروموسوم 7 (MMA7؛ 45-55 ميجا بايت). الأسهم المنحدرة تشير إلى اتجاه التحالفات في المناطق مباشرة أو مقلوب. فجوات واسعة في محاذاة ومن المقرر أن مشروع وضع تسلسل الجينوم وتصفية التحالفات. HERC2 تظهر التشابه تسلسل الدوائر وتكشف BP2، BP3 وBP4 الازدواجية قطعي. وتظهر مواقف علامة المرافقة BP2 وBP3 الازدواجية قطعي كخطوط متقطع العمودية. الكتلة LCR15 الرابع (13 يظهر) التي تعين بين كتلتين الجينومية من ترتيب مختلف في الماوس / محاذاة الإنسان باعتبارها السهم العمودي. صناديق الأفقية الداكنة والفاتحة هي تمثيل الماوس / محاذاة تسلسل الإنسان.

مناقشة

وصفنا هنا انعكاس الجيني 15q11-Q13 في أمهات المرضى AS BP2 / 3 حذف وفي 9٪ من المرضى من عموم السكان. منذ BP2 وBP3 الازدواجية قطعي وعادة ما تكون في اتجاه ذيل إلى ذيل (10، 11)، ومن المحتمل أن تنشأ عن أحداث إعادة التركيب غير المتجانسة بين الهوية تسلسل عالية من هذه الازدواجية قطعي الكروموسومات مقلوب. ينبغي اقتراح لشرح الاستعداد لحذف في المواد التي تحمل BP2 / 3 انعكاس، توجه جنبا إلى جنب الجزئي داخل BP2 وBP3 مقلوب الكتل. وبالتالي، فإن انعكاس بين BP2 وBP3 تغيير التوجه النسبي للجزء الداخلي من الازدواجية قطعي أنه من خلال عرضية غير المتكافئ على الأحداث بينهما، من شأنه أن يؤدي إلى الحذف أو الازدواجية في النسل.
منذ انقلاب 15q11-Q13 موجود في 4.5٪ من الكروموسومات من الموضوعات من عامة السكان، ولأن هناك حالات قليلة جدا من تكرار للQ13 15q11 AS الحذف (خطر أقل من 1٪) (16)، وانتفاذ من انعكاس الجيني فيما يتعلق بمخاطر تعاني من حذف BP2 / BP3 في نسل الأمهات الناقل من المرجح أن تكون منخفضة (0.1-0.2٪). التباين الفردي يمكن أن توجد في عملية إعادة التركيب أو الآلات، والتي يمكن أن تزيد من القابلية للتعديل وإعادة ترتيب. وتجدر الإشارة إلى أن منظمة معقدة من duplicons قد يؤدي إلى إعادة ترتيب مختلفة، وأنه كما سبق ذكره من قبل جيليو وآخرون. (5)، وبعضها قد لا تكون متوافقة مع تطور الجنين طبيعية نسبيا. كروموسوم duplicons 15q11-Q13 قد توسط الحذف ليس فقط والحزب الاتحادي الديمقراطي الجرد (15) الكروموسومات ولكن أيضا الكروموسومات لامركزية الجزء 15q13-qter. وهكذا، فإن الأمهات انعكاس متخالف قد يكون في الواقع عدة أجنة غير متوازنة للكروموسوم 15 إعادة ترتيب، ولكن إما الجنين المجهض precociously أو كروموسوم غير طبيعي 15 وخسر بسبب عدم وجود السنترومير وظيفية. ومن الممكن أيضا أن الأجنة مع حذف 15q11-Q13 أقل قابلة للحياة من أجنة طبيعية، والتي ربما يفسر التردد المنخفض من تكرار الحذف في أمهات تحمل 15q11-Q13 BP2 / 3 انعكاس. ومن العوامل الأخرى التي يمكن أن تؤثر على القابلية للحذف أو ازدواجية في الأمشاج الإناث التي تحمل انعكاس BP2-BP3 يمكن أن يكون موقع محدد حيث وقع إعادة التركيب مما أدى إلى انقلاب. على الرغم من أن العينة المدروسة منخفضة نسبيا، ويبدو أن الأحداث انعكاس قعت في قضايا مختلفة، في مواقع مختلفة داخل BP2 وBP3، والكشف عنها بواسطة تقلب نقاط التوقف. وبالتالي، يجب على موقف مختلف من نقاط التوقف للانقلاب في BP2 قطعي الازدواجية يؤدي إلى طول مختلفة من مناطق هوية تسلسل الموجهة بالترادف بين BP2 وBP3 الازدواجية قطعي. وهذا يمكن أن يؤثر على وجود تسلسل المعرضة للإعادة التركيب في التوجه المباشر داخل كتل من الازدواجية قطعي مقلوب.
لقد وجدنا أن الأمهات BP2-BP3 مقلوب لديها نقاط التوقف المتغيرة. وهذا يدل على أنه لا يوجد بقعة ساخنة إعادة التركيب الكبرى، والتي ربما يرجع ذلك إلى الحجم الكبير (أكثر من 400 كيلو بايت) من BP2 وBP3 الازدواجية قطعي (10، 11). ويؤيد ذلك الملاحظات المستقلة للمحققين آخرين تحليل PWS وAS المرضى (17). دراسة Mewborn وآخرون (17 الكشف) سبع نقاط التوقف مختلفة (من 24 PWS / AS المرضى حذف) واقترحوا وجود الصبغيات مقلوب كعامل قابلية للحذف. لقد أظهرنا أيضا هنا أن هناك تفاوتا في نقاط التوقف حذف الدرجة الثانية داخل قطعي الازدواجية BP2. سوف المظاهرة من البقع المحتملة انعكاس أو حذف الساخنة داخل BP2 وBP3 الازدواجية قطعي في حاجة إلى تحليل عدد كبير من العينات وتوصيف مفصل للالازدواجية قطعي. وجود PFGE أخرى العصابات خارج في عينات من عموم السكان يدل على منظمة معقدة في المنطقة. تم العثور على مناطق متعددة الأشكال الكبيرة الأخرى الأقرب إلى BP1 (18) والبعيدة لBP3 (19).
لقد الكشف عن حالتين من BP2 / 3 AS المرضى وحالتين من BP1 / 3 AS المرضى فيها الأمهات لا تحمل العكس 15q11-Q13 كشفها بواسطة FISH مع تحقيقات المستخدمة في هذه الدراسة. وبما أن المنطقة تحتوي على هذه الازدواجية قطعي معقدة للغاية، مع غيرها من العديد من الازدواجية المشتركة جزئيا قطعي (LCR15s) (13)، فمن الممكن أن هذه الحالات لديهم اشكال معينة داخل كتل من الازدواجية قطعي. يجب اختبار هذه الفرضية بمجرد ان نعرف المنظمة مفصلة لهذه الازدواجية قطعي في عدد كبير من الموضوعات مع الحذف والضوابط العينات.
ومن المثير للاهتمام، وتبين الماوس / محاذاة تسلسل الإنسان التوجه المقلوب من تسلسل بين BP2 وBP3 الازدواجية قطعي. بالإضافة إلى ذلك، إعادة ترتيب الأخرى بين الماوس والمناطق syntenic الإنسان ترتبط مع BP وLCR15 المواقع. هذه النتائج من ظاهرة الانقلاب وإعادة ترتيب بين الماوس وتسلسل الإنسان يحيط بها الازدواجية قطعي مماثلة لتلك التي تم اكتشافها في المنطقة WBS (20، 21).
وتشير البيانات المتوفرة لدينا أن الشكل الأكثر شيوعا من حذف AS تشمل الدرجة الثانية المرضى يعتمد على اختلال بين قطعي الازدواجية BP2 وBP3 تطوق المنطقة 15q11-Q13، بسبب انعكاس المنطقة حذف المستهدفة. منذ نفس النوع من BP2 / 3 الحذف موجود في المرضى PWS (7 - 9)، ومن المتوقع أن بعض الحذف في هؤلاء المرضى بوساطة انقلاب 15q11-Q13 الموصوفة هنا، ولكن الناجمة عن الصبغيات الأبوية. وعلاوة على ذلك، نحن لا نعرف في هذه المرحلة في حالة حدوث إعادة ترتيب أخرى في النسل حاملي العكس 15q11-Q13، أو التي هي الجدوى من الأجنة التي تحمل إعادة ترتيب 15q11-Q13. ترتيب مختلف القطاعات في الماوس / البشري المنطقة syntenic البعيدة إلى BP3 يمكن أن توفر معلومات مفيدة لتحليل إعادة ترتيب الأخرى من كروموسوم 15q11-Q14، خاصة تلك التي تم وصفها في حالات التوحد (+22 - +24). وفي الختام، فإن البيانات المقدمة هنا تعزز فكرة أن الأشكال الجينومية يمكن أن توفر القابلية للدي نوفو إعادة ترتيب الكروموسومات البشرية (4 - 25)، وأدلة أخرى الحالي للدور الازدواجية قطعي في التباين الجيني.

المواد والأساليب

المرضى

تم تشخيص المرضى الذين يعانون من AS وفقا لمعايير السريرية للاضطراب وتحليل الحذف في المنطقة 15q11-Q13. تكونت عينة الدراسة من ستة BP2 / 3 AS المرضى والأمهات يناظرها، وهما BP1 / 3 AS المرضى والأمهات يناظرها، سبعة UPD 15 أمهات، ثلاث أمهات AS المرضى الذين يعانون من الطفرات UBE3A، و 44 الضابطة من خضوعه عامة السكان الاختبارات المعملية الدم الروتينية. تم الحصول على الموافقة المسبقة من المرضى وأهاليهم وعينات السيطرة.

تحليل FISH

تم تصنيف المرضى الذين يعانون من متلازمة AS كما حذف من خلال الطورية FISH مع تحقيقات تجارية محددة (Vysis). AS الصف الأول تم تعريف (BP1 / 3) المرضى الذين يستخدمون تحقيقات FISH BAC RP11-25C1 وRP11-289D12 (بنك الجينات غ الانضمام. AC016204 وAC090764، على التوالي؛ الشكل 1 A). كل من الحيوانات المستنسخة خريطة بين BP1 وBP2 وفقا لعلامات NIB1540 أو D15S18 وD15S542، على التوالي (9). AS الدرجة الثانية (BP2 / 3) وقد تم تحديد المرضى الذين يستخدمون تحقيقات FISH BAC RP11-494F2 وRP11-322N14 (بنك الجينات غ الانضمام. AC103750 وAC017046، على التوالي)، والتي تتوافق مع NDN ومواضع OCA2 داخل / المنطقة AS حذف PWS، على التوالي (14). خرائط تسلسل RP11-494F2 في نهاية الداني وتسلسل RP11-322N14 في النهاية البعيدة من المنطقة BP2-BP3. استنساخ RP11-322N14 أيضا يحتوي المعروف PWS / AS علامات كما D15S931 وD15S24. لتعريف الحذف كما BP1 / BP3 أو BP2 / BP3 أجرينا تجارب FISH في طور متوسط ​​جميع المرضى باستخدام كل RP11-289D12 وRP11-25C1 في تجارب منفصلة. تم تعريف توقف البعيدة BP3 في جميع الحالات عن طريق ثنائي اللون FISH مع تحقيقات RP11-494F2 وRP11-25D17. وقد تم تحليل جميع أمهات AS المرضى للانقلاب 15q11-Q13 من قبل كل من الطورية والطور البيني FISH. استخدمت تحقيقات RP11-494F2 وRP11-322N14 في الدراسات FISH الطورية المزدوجة (26). تحقيقات لهما المسافة المادية من حوالي 4 ميجا بايت. وهكذا، للحد من تداخل الإشارات استخدمنا عدة ترجمة Vysis نيك مصممة لوضع العلامات مضان المباشر من DNA وذلك لتجنب تضخيم إشارة. في حين فحص الشرائح رأيناها فقط تلك طور متوسط ​​مع إشارات خضراء وبرتقالية مميزة، ونبذ تلك مع تداخل منها. وقد تم تحليل ما لا يقل عن 30 طور متوسط ​​في كل حالة. كنا مجموعتين من ثلاثة تحقيقات كل لتحليل الخلايا في الطور البيني. من أجل تجنب سوء الفهم نتيجة لحلقات الإقليمية، تحقيقات من كل مجموعة غطت منطقة أصغر (حوالي 2 و 2.5 ميجا بايت، على التوالي) من أنه بحلول تحقيقات المستخدمة في التجارب الطورية (حوالي 4 ميجا بايت) مغطاة. وكانت مجموعتي RP11-494F2 وRP11-131I21 (بنك الجينات انضمام رقم AC009696)، بالإضافة إلى RP11-25C1 باعتباره التحقيق السيطرة، وRP11-20B10 (بنك الجينات انضمام رقم AC0022603) وRP1-322N14 بالإضافة إلى RP11-25D17 (بنك الجينات لم الانضمام . AC021360) باعتباره التحقيق السيطرة. واستخدمت تحقيقات من كلتا المجموعتين في FISH الثلاثي الألوان (26). درسنا ما لا يقل عن 40 نواة لكل مجموعة اختبار وسجلنا فقط تلك الكروموسومات حيث يمكن تصور كل ثلاثة تحقيقات في توافق وثيق مع بعضها البعض. هذه التجارب كان ينبغي أن يكون قادرا على كشف العكس من المناطق BP1-BP3 وBP2-BP3 ولكن ليس تلك التي تنطوي على مناطق BP1-BP2، التي يصعب الكشف مع البكالوريا المتاحة فعلا. أجريت التحقيق وإعداد الشرائح، تهجين الحمض النووي، وتحليل استخدام الأساليب التقليدية. وقد تم تحليل لا يقل عن 20 خلايا لكل حالة التي تصور المجهري المباشر وتحليل التصوير الرقمي. وصفت minipreparations BAC DNA مع SpectrumGreen-16dUTP أو SpectrumOrange-16dUTP (Vysis) من قبل ستاندرد رد فعل نيك الترجمة وFISH بروتوكول أجريت وفقا لتعليمات المورد. تم دراسة الشرائح تحت المجهر مضان مجهزة مجموعة التصفية المناسب.

تحليل تسلسل 15q11-Q14

يونيو 2002 (NCBI بناء 30) تم الحصول البشري تسلسل كروموسوم 15 من خلال UCSC (جامعة كاليفورنيا، سانتا كروز) الجينوم البشري متصفح الانترنت (ftp://genome.cse.ucsc.edu/goldenPath/05apr2002/). تحديد الازدواجية قطعي من قبل الانفجار كما وصفها (27). تسلسل كروموسوم 15 وملثمين تكرار-من العناصر المتكررة للغاية وتمت مقارنة تسلسل ملثمين ضد نفسها على نطاق كروموسوم BLAST للكشف عن الازدواجية قطعي الصبغي باستخدام BLAST2 الإعداد مع خيار MegaBlast على خادم يونكس المحلي. تم إنشاء جدول تقرير BLAST استخدام - خيار القيادة D. تم تحليل النتائج في وقت لاحق وفقا للمعايير التالية: نتائج BLAST ذات هوية تسلسل ≥90٪، ≥80 غليان في الطول، ومع القيمة المتوقعة ≤ ه -30. أزيلت جميع الزيارات متطابقة، بما في ذلك التحالفات BLAST دون المستوى الأمثل معترف بها من قبل التحالفات تداخل متعددة، وكذلك يضرب المرآة (الاتجاه المعاكس تنسيق التحالفات) من نتائج انفجار من داخل الصبغي مجموعة. محاذاة إحداثيات مفصولة مسافة الجار وانضم أقل من 5 كيلو بايت معا في وحدات لحساب تسلسل المتكررة ملثمين، وحدات فقط مع حجم بقيت أكثر من 10 كيلو بايت للتحليل في هذه الدراسة (28). تم تحويل النتائج المتولدة من الكشف عن الازدواجية قطعي في وقت لاحق إلى تنسيق ملفات كمدخل للعرض باستخدام GenomePixelizer (29)، التي تم الحصول عليها من www.atgc.org/GenomePixelizer/GenomePixelizer_Welcome.html.
وتم الحصول على تسلسل الخام من الماوس (يوليو 2002) والبشرية (سبتمبر 2002) من مستودع تسلسل Ensembl، ملثمين مع RepeatMasker (http://repeatmasker.genome.washington.edu/cgi-bin/RM2_req.pl) محليا والانحياز باستخدام MegaBlast . تم تحليل التحالفات الناتجة باستخدام مخطوطات برل على أساس وحدات bioperl. تم إنشاؤها يعرض رسومية من الاصطفافات من بيانات تحليل باستخدام عدة مخطوطات برل.

تحليل PFGE

تم الحصول على مسبار 1، وتقع بالقرب من علامة D15S542، عن طريق PCR مع الاشعال 5'-cctgtggtctccttgacag-3 "و5'-caaaacactctgaaagcagtg-3" مصممة على بنك الجينات انضمام رقم AC016446 (RP11-289D12)؛ تم الحصول على المسبار 2، وتقع بالقرب من علامة D15S543، عن طريق PCR مع الاشعال 5'-gaatccagcatggtgctcag-3 "و5'-ccaggagacaacttggtttcc-3" مصممة على بنك الجينات انضمام رقم AC073446 (RP11-757E13)؛ تم الحصول على التحقيق 3، وتقع بالقرب من علامة D15S931، عن طريق PCR مع الاشعال 5'-caataatgggagggaggtcac-3 "و5'-ctcattcaagcattcacctgt مصممة على بنك الجينات انضمام رقم AC017046 (RP11-322N14)؛ مسبار 4، وتقع بالقرب من علامة D15S1233، تم الحصول عليها عن طريق PCR مع الاشعال 5'-cccagcttccatgctgatg-3 "و5'-gggtggagtgagaagtgtc-3" مصممة على بنك الجينات انضمام رقم AC021360 (RP11-25D17). قبل التحقيق تنقية، وsubcloned المقابلة تحقيقات PCR في pGEM-T سهل ناقلات (PROMEGA). أجريت القيود PFGE DNA عالية الجزيئية باستخدام 80U للانزيم المقابلة خلال 24 ساعة وelectrophoresed عن طريق نظام CHEF مخطط XA (بيو راد). كانت الظروف التهجين القياسية في 7٪ SDS و 0.5 M العازلة الفوسفات، وبعد يغسل صرامة 0،5-0،2 × SSC في 55-65 درجة مئوية. تم تنفيذ اثنين على الأقل تحليلات مستقلة تماما عن كل انزيم التقييد والتحقيق.

 

__________________
استشارى الادوية الطبيعيه وباحث وخبير فى علاجات التوحد
رد مع اقتباس
إضافة رد

أدوات الموضوع
طريقة عرض الموضوع

تعليمات المشاركة
لا تستطيع إضافة مواضيع جديدة
لا تستطيع الرد على المواضيع
لا تستطيع إرفاق ملفات
لا تستطيع تعديل مشاركاتك

BB code is متاحة
كود [IMG] متاحة
كود HTML معطلة

الانتقال السريع


 المكتبة العلمية | المنتدى | دليل المواقع المقالات | ندوات ومؤتمرات | المجلات | دليل الخدمات | الصلب المشقوق وعيوب العمود الفقري | التوحد وطيف التوحد  | متلازمة داون | العوق الفكري | الشلل الدماغي | الصرع والتشنج | السمع والتخاطب | الاستشارات | صحة الوليد | صحة الطفل | أمراض الأطفال | سلوكيات الطفل | مشاكل النوم | الـربـو | الحساسية | أمراض الدم | التدخل المبكر | الشفة الارنبية وشق الحنك | السكري لدى الأطفال | فرط الحركة وقلة النشاط | التبول الليلي اللاإرادي | صعوبات التعلم | العوق الحركي | العوق البصري | الدمج التربوي | المتلازمات | الإرشاد الأسري | امراض الروماتيزم | الصلب المشقوق | القدم السكرية



الساعة الآن 11:06 PM.