فحص السكان في fraxa وfraxe الامكنه: التحليلات الجزيئية للبنين مع صعوبات التعلم وأمهاتهم

[رافت ابراهيم]

 

http://hmg.oxfordjournals.org/content/5/6/727.full

https://translate.googleusercontent....ebCWHl9KQHfPRA

وأفادت النتائج الأولية على مسح واسع على السكان الجزيئي للFRAXA وFRAXE. جميع الأولاد الذين يعانون من صعوبات التعلم غير المبررة مؤهلة لإدراجها في دراسة وتقديم البيانات في أول اختبار 1013. تم اختبار الأفراد لعدد من تكرار ثلاثي النوكليوتيد في FRAXA وFRAXE وكتابة لمدة أربعة المرافقة الواسمات الوراثية. تم اختبار أمهات الأولاد 760 لتحديد استقرار FRAXA وFRAXE يكرر أثناء الإرسال، وتوفير عدد سكانها الكروموسومات السيطرة. وكان تردد FRAXA الطفرات كامل 0.5٪، مما يعطي تردد السكان من 1 في 4994، أقل بكثير مما تشير إليه التقارير السابقة. تم الكشف عن أي طفرات الكاملة FRAXE، مؤكدا ندرة هذه الطفرة. في الكروموسومات X الأولاد، اكتشفنا واحدة premutation FRAXA مع 152 يكرر واحدة premutation FRAXE المفترضة من 87 تكرارات. لم يشاهد كامل أو premutations في الكروموسومات السيطرة. تم الكشف عن فائض كبير من الأليلات المتوسطة في كلا FRAXA وFRAXE في الكروموسومات X الأولاد بالمقارنة مع الكروموسومات مراقبة الأمهات. هذا يشير إلى أن يكرر unmethylated كبيرة نسبيا من أحجام 41-60 لFRAXA و31-60 لFRAXE قد تلعب دورا في الضعف العقلي. لم يتم العثور على عدم الاستقرار في الإرسال من الأليلات الحد الأدنى أو مشتركة في أي FRAXA أو FRAXE، ولكن شاهدنا اثنين من عدم الاستقرار ممكنة في نقل FRAXA واثنين من عدم الاستقرار محددة في نقل FRAXE بين 43 meioses التي تنطوي على الأليلات وسيطة أو premutation الحجم. لم نعثر على أي اختلال العلاقة بين FRAXA وFRAXE ولكن لم تجد اختلال التوازن الربط كبير بين الأليلات كبيرة في FRAXE وأليل 3 في DXS1691 موضع متعددة الأشكال تقع 5 كيلو بايت البعيدة إلى FRAXE.

القسم السابق القسم التالي

تقديم

الطفرات في اثنين مواضع على القاصي XQ، FRAXA وFRAXE، قد تسبب الضعف العقلي. تقريبا جميع الطفرات الضارة في موضع FRAXA ومن المقرر أن توسع من ثلاثي النوكليوتيد تكرار CGG في نهاية 5 'من اكسون 1 في الجين FMR1 (1 - 3). هذا التوسع يمكن أن توجد في شكلين، وهي premutation غير المستقر الذي لم يعتقد أن تترافق مع الضعف العقلي والذي يبدو أن له أي تأثير على مستوى البروتين FMR1 (4، 5)، والطفرة الكاملة التي هي أيضا غير مستقرة ولكن الذي يتم إسكات الجينات FMR1 التي كتبها hypermethylation للجزيرة الدليل السياسي الشامل (6). غياب البروتين FMR1 هو سبب الضعف العقلي والنمط الظاهري خفية ولكنها سمة من متلازمة X الهش (7). في حين أن درجة الضعف العقلي المرتبطة طفرة كاملة في الذكور هو متغير، والغالبية العظمى لديها مستوى معتدل من التخلف مع IQ بين 30 و 50 (8).
تم التعرف على مكان FRAXE لأول مرة في المرضى الذين يعانون من المواقع الهشة الفولات سينسي-موانع في Xq27-28 لكن لا دليل على توسع CGG في موضع FRAXA (9، 10). كشفت دراسات لاحقة FRAXE أن يكون تكرار متعدد الأشكال دول مجلس التعاون الخليجي المرتبطة جزيرة الدليل السياسي الشامل المجاورة، ~600 القاصي كيلوبايت إلى FRAXA (11). في المرضى الذين يعانون معربا عن الموقع الهش، وعدد من يكرر هو أكبر بكثير من المعتاد، وهناك hypermethylation يصاحب ذلك في جزيرة الدليل السياسي الشامل (11). حتى الآن، لم يتم التعرف على الجين FRAXE، على الرغم من الجينات المرشحة وقد اقترحت (12، 13) ويفترض أن هذا الجين سوف تعمل بطريقة مماثلة لFRAXA (14). ويرتبط الطفرة FRAXE مع مستوى معتدل من الضعف العقلي ولكن، على عكس FRAXA، يبدو أن هناك أي ميزات المظهرية المميزة (+15 - +17). ومع ذلك، عدد قليل نسبيا من الأسر التي لديها طفرة FRAXE وقد وصفت وبالتالي المعلومات حول النمط الظاهري، أو سلوك تكرار دول مجلس التعاون الخليجي هو متفرق.
من القواسم المشتركة مع غيرها من الأمراض الثلاثي تكرار، FRAXE يدل تحسبا مع الزيادة التدريجية في عدد تكرار على مر الأجيال المتعاقبة في الأسر المتضررة (11، 14، 17). كما وحظ انخفاض في تكرار الرقم في FRAXE في كثير من الأحيان، بما في ذلك من انتكاسات كامل لpremutation، وفي هذا الصدد FRAXE يختلف عن FRAXA (11، 16، 17). من المعروف أن الذكور مع الطفرة FRAXE الكاملة لإنتاج وربما تكون قد أثرت بنات (16)، وعلى النقيض من FRAXA حيث نادرا ما استنساخ الذكور طفرة الكاملة وعندما يفعلون ذلك نقل أليل premutation لبناتهن (+18 - 20). هناك لا، لذلك، يبدو أن تقييد نفس الجنس محددة بشأن نقل الأليلات FRAXE كما ينظر في FRAXA.
وعموما كان يعتقد من حدوث متلازمة X الهشة أن تكون بين 1 في 1000 و 1 في 2600 من الذكور، استنادا إلى مسوحات الوراثية الخلوية من السكان محددة من الأفراد الذين يعانون من إعاقة عقلية (21، 22). ومع ذلك، فمن الواضح الآن أن المواقع الهشة لاحظ شملت موقع الهش نادر FRAXE وكذلك موقع الهش مشترك في Xq28. وبالتالي وقوع FRAXA premutations كاملة أو في عدد السكان غير معروف موثوق. حدوث الطفرات الكاملة FRAXE غير معروف. وقد تأكدت غالبية FRAXE الطفرات الكاملة ذكرت نتيجة اختبار FRAXA. مسوحات الكشف عن FRAXE نادرة؛ وجد استبيان ذكرت مؤخرا أي حالة من حالات FRAXE طفرة الكاملة في 300 ذكور اختبار (23).
نحن باجراء دراسة استقصائية عدد كبير من الفتيان الذين تتراوح أعمارهم بين 5-18 في نظام المدارس الحكومية الذين لديهم صعوبات في التعلم والتي أنشئت هناك أيضا سبب. نحن أيضا الحصول على الحمض النووي من أمهاتهم. يعتبر X تنتقل من الأم إلى الابن كروموسوم كروموسوم "التجريبي"، في حين أن لا ينتقل هو "السيطرة" كروموسوم. وتشمل أغراض المسح تحديد (ط) تواتر الأليلات غير عادية، بما في ذلك في نطاق ما قبل وكامل حجم الطفرة، في مواضع FRAXA وFRAXE في الكروموسومات التجريبية والضابطة. (ب) والنمط الفرداني فيما يتعلق أربعة الأشكال المرافقة (DXS548، FRAXAC1، FRAXAC2، DXS1691) في المنطقة من كروموسوم X الذي يحتوي على FRAXA وFRAXE المكاني والعلاقة بين النمط الفرداني وحجم FRAXA وFRAXE الأليلات. و (ج) استقرار الأليلات في انتقال الفيروس من الأم إلى الابن.

 

[رافت ابراهيم]

 

وكان مجموع سكان أولد بويز 5-18 سنة في المنطقة المدروسة 39 269، منهم 37 028 كانوا في المدارس التي وافقت على المشاركة. في المدارس المشاركة، كان هناك 1502 (4٪) الفتيان الذين التقى معاييرنا لإدراجها في الدراسة وهذه 1068 (71٪) وافقت على تقديم عينة الحمض النووي. الأولاد 434 منهم من أننا لم الحصول على عينة تألفت من 55 الذين رفضوا المشاركة و 379 منهم من كان لدينا أي رد على رسائلنا. حصلنا على عينة من الحمض النووي من 760 الأمهات يمثلون 71٪ من الأولاد المشاركة. تم الحصول على الحمض النووي من فرش الفم. لم نعثر على أي صعوبة مع هذا النهج. عينات من 98٪ من الأولاد و 95٪ من الأمهات أسفرت DNA مرضية. وقد تحققت نتائج FRAXA ناجحة ل1013 الأولاد و 726 من الأمهات والنتائج FRAXE ناجحة ل992 البنين و 725 الأمهات. تم تقسيم الأليلات FRAXA وFRAXE إلى خمس فئات على أساس حجمها (الجدول 1).

الجدول 1

توزيع FRAXA وFRAXE الأليلات حسب الفئة

FRAXA مكان

حددنا خمسة ذكور مع طفرة الكاملة بين 1013 الأولاد ذوي صعوبات التعلم الذين اختبرنا (الجدول 1). وكان أربعة من هؤلاء الأولاد الفسيفساء مع كل طفرة أليل الحجم قبل والكامل وأصيب اثنان معروفة لنا. وقد وضعت خمسة أولاد X الهش من اجمالي عدد السكان البالغ 37 028 الفتيان. من 1502 الأولاد المستحقين في هذه الفئة من السكان، وقد تم اختبار 1013 أو 67٪ لFRAXA. وهكذا، في الواقع، وحجم السكان هو 24 973 (67٪ من 37 028)، وهو ما يعطي تردد عدد سكانها ب 1 في 4995.
ويرد توزيع أحجام أليل لFRAXA في الشكل 1 والتوزيع حسب الفئة في الجدول 1. عندما فئات الحد الأدنى ومشتركة مجتمعة مقارنة مع الفئات المتوسطة وpremutation جنبا إلى جنب، وهناك فائض كبير من الطبقة الأخيرة بين التجريبية الكروموسومات (χ 2 1 = 4.26، P = 0.039). ويرد توزيع الأليلات المتوسطة وpremutation الحجم في الكروموسومات التجريبية والضابطة في الجدول 2. كما يمكن أن يرى، والفائض من الأليلات كبيرة بين الكروموسومات التجريبية يبدو أن إشراك الأليلات عبر نطاق حجم كله، وليس مجرد ذوي> 50 يكرر.

FRAXE مكان

لم نعثر على أي حالات FRAXE طفرة الكاملة في 992 الفتيان اختبرت بنجاح، وإعطاء فاصل الثقة 95٪ من 0-،003 (الجدول 1). من 1502 الأولاد المستحقين في عدد السكان، وقد تم اختبار 992 أو 66٪ لFRAXE. وهكذا، فإن حجم السكان بشكل فعال 24 425 (66٪ من 37 028). وإذا افترضنا أن جميع الذكور طفرة كاملة FRAXE قد أدرجت بين الأولاد المستحقين، فاصل الثقة 95٪ من مجموع السكان 0-،0001. فشل واحد وعشرين الأولاد والأم واحدة FRAXE PCR اختبار على الرغم من النجاح لFRAXA. كانوا جميعا من المدرسة الأولى التي زارها في المسح وفشل لعلامة واحدة أخرى على الأقل. وهذا يشير إلى DNA ذات نوعية رديئة وليس كتلة غير المعترف بها FRAXE premutations كاملة أو. استبعدت هؤلاء الأفراد من التحليل.

الشكل 1

مقارنة التوزيعات أليل FRAXA في الكروموسومات التجريبية والضابطة.

وتمت مقارنة توزيع FRAXE تكرار الأليلات في الأولاد مع أنه في السيطرة X الكروموسومات (الشكل 2). وكان التوزيع في كل مجموعة وضعين، واحدة في 15 تكرارات والثانية في 24 أو 25 تكرارات. ظهرت توزيعات اثنين superimposable، بصرف النظر عن الحق في ذيل اليد، والتي كانت تعد في الأولاد، كما هو موضح أدناه. وكانت أليلات> 30 أو <11 تكرار نادرة. كان أصغر أليل لوحظ في هذه السلسلة من أربع يكرر ينظر في المريض مع طفرة FRAXA كاملة. والتسلسل لا الأليلات، لذلك لا يمكن استبعاد الحذف في المنطقة المحيطة تكرار الثلاثية في هذا أو أي مريض آخر. عند مقارنة فئات الحد الأدنى ومشتركة جنبا إلى جنب مع الفئات المتوسطة وpremutation مجتمعة هناك فائض كبير من الطبقة الأخيرة بين الكروموسومات التجريبية (χ 2 1 = 4.39، P = 0.036). ويرد توزيع الأليلات المتوسطة وpremutation في الجدول 2.

اختلال التوازن الربط

نحن أكدت وجود صلة بين الخلل DXS548، FRAXAC1، FRAXA وFRAXAC2، كما سبق أن عرض (24 - 26). كان النمط الفرداني 2-1-3 أكثر شيوعا بكثير بين الأليلات مع تكرار أرقام> 40 من ذوي <40 تكرارات (الجدول 3). بين الأليلات مع> 40 تكرارات، كان هناك نسبة أعلى من النمط الفرداني 2-1-3 في التجريبية من الكروموسومات السيطرة، ولكن الفرق لم يكن كبيرا (χ 2 1 = 1.44، P> 0.2). ونحن ننظر أيضا لاختلال التوازن الربط عبر 600 كيلوبايت FRAXA / FRAXE الفاصل. تم إجراء التحليل على الأليلات تجميعها في فئات لFRAXA وFRAXE وعلى أزواج الفردية من الأليلات لمواضع أخرى. لم يتم العثور على الخلل الكبير بين أي مواضع عبر هذه الفترة 600 كيلوبايت.

الجدول 2

توزيع FRAXA المتوسطة وpremutation والأليلات FRAXE

الجدول 3

توزيع 2-1-3 النمط الفرداني للمواضع DXS548، FRAXAC1 وFRAXAC2 في FRAXA

الجدول 4

توزيع الأليلات في DXS1691 مكان في FRAXE

وثنائي النوكليوتيد تكرار تعدد الأشكال جسديا الأقرب إلى الثلاثي تكرار FRAXE في دراستنا هو DXS1691، التي تقع ~5 القاصي كيلو بايت إلى التكرار. هذا التعدد ثلاثة الأليلات المشتركة (1 = 106 سنة مضت، 2 = 104 سنة مضت، 3 = 102 بي بي) وجدنا علاقة وثيقة جدا بين أليل 3 والأليلات المتوسطة في FRAXE (P <0.001). تسعون اثنين في المئة من FRAXE تتكرر في المدى المتوسط ​​وpremutation هي بالتعاون مع DXS1691 أليل 3 مقارنة مع 28٪ فقط في مجموعة مشتركة والحد الأدنى (جدول 4).

الرقم 2

مقارنة التوزيعات أليل FRAXE في الكروموسومات التجريبية والضابطة.

استقرار الأليلات الفردية

تم فحص الاستقرار أثناء الإرسال عن طريق مقارنة أحجام أليل في الأمهات والأولاد. بهذه الطريقة تم دراسة 726 meioses الإناث. في FRAXA، تم الكشف عن اثنين من التغييرات الممكنة في تكرار العدد، باستثناء بالكامل وpremutations، وكلاهما في المدى المتوسط. الحد من تكرار واحد 43-42 وزيادة تكرار واحد من 53 إلى 54. حجم كبير من هذه الأليلات يعني أن المنتجات PCR ولدت لديها العديد من "العصابات تلعثم" ويبدو طخت بعض الشيء. وهذا يجعل من الصعب تفسير، وبالتالي فإننا قد وصفت هذه الاختلافات الممكنة كما التي تنتظر مزيدا من التحقيق.
في FRAXE، تم الكشف عن حالتين من عدم الاستقرار. كان أول أليل وسيطة في الأم التي كان 37 و 17 تكرارات الذي كان نمط الفسيفساء من 37 و 27 تكرارات في كل من عينات الدم الشدق وابنه (الشكل 3 أ). وأظهرت لطخة الجنوبية نمط الذكور العادي مع فرقة واحدة في نطاق unmethylated، استبعاد إمكانية حدوث مزيد من الاصباغ في نطاق المتضررين وأيضا مؤكدا وجود فقط X كروموسوم واحد في هذا الشخص. كما هو متوقع، والعصابات اثنين الكشف عنها بواسطة PCR لا يمكن أن تحل على لطخة الجنوبية. كان المثيل الثاني من عدم الاستقرار في FRAXE أليل premutation المفترض في صبيا التي زادت في الحجم بنسبة 21 تكرارات، 66-87 في انتقال الفيروس من الأم إلى الابن (الشكل 3 ب). وأظهر تحليل لطخة جنوب أليل أن تكون unmethylated في كل من الأفراد، مع حجم التوسع بما يتفق مع البيانات PCR.

الشكل (3)

المواد الهلامية عرض المنتجات FRAXE PCR المسمى مع 32 P من القضيتين التي تم الكشف عن عدم الاستقرار في عدد تكرار أثناء الإرسال.

القسم السابق القسم التالي

مناقشة

تردد 0.5٪ FRAXA الطفرات كاملة في عدد السكان من الذكور يعانون من صعوبات التعلم هو أقل بكثير من تلك التي ذكرت من مسوحات أخرى، وأنه يرجع ذلك جزئيا إلى حقيقة أن اختبرنا الكثير من الأولاد الذين لديهم إعاقة ذهنية الحد الفاصل فقط. في معظم الاستطلاعات كبيرة من الأولاد الذين يعانون من صعوبات التعلم، تم العثور على بعض 2-4٪ أن تكون X الهش الإيجابي التشخيص الوراثي الخلوي (21، 22). ومن المتفق عليه عموما الآن أن وتيرة الكاملة X الطفرات الهشة هو أقل بكثير مما ذكر في السابق على أساس المسوحات الوراثية الخلوية (+27 - 29). إعادة الاختبار الجزيئي للX الأفراد الهش أصلا تحديدها في الدراسات الاستقصائية الوراثية الخلوية يعطي تقديرا لتواتر الطفرات كاملة من الجينات FRAXA من ~1 في 4000 من الذكور (28). هذا هو الحد الأدنى تردد لإعادة الاختبار الجزيئي للأفراد إيجابي cytogenetically يحدد كل ايجابيات كاذبة ولكن لا تحدد أي سلبيات كاذبة. الحس السليم والخبرة تملي أن هؤلاء الأفراد وجود (30). في حين تردد من 1 في 4994 ذكور التي تم الحصول عليها في استطلاعنا أقل من تقديرات حساب تستند إلى دراسات استقصائية الوراثية الخلوية، وأقل أيضا من وتيرة 1 في 3625 من الذكور وجدت في مسح تجريبي لدينا (27)، والفروق بين التقديرات الثلاثة غير الهامة (χ 2 2 = 0.23، P> 0.8). وبالتالي وتيرة FRAXA قد يكون جيدا فقط 1 في 4000-1 في 5000 الذكور في السكان الأباعد القوقاز.
تردد premutations يعتمد بشكل حاسم على تعريفها الدقيق، وعلى الدقة التي يقاس عدد تكرارات. وجدنا premutation أليل واحد الحجم لFRAXA بين الكروموسومات التجريبية. لم يشاهد premuta التي ستعقد بين 726 الكروموسومات السيطرة، على الرغم من أننا لم نلاحظ أليل واحد مع 52 واحد مع 53 تكرارات في الضوابط (الجدول 2). هناك عدد من التقارير من وتيرة premutation الأليلات الحجم في FRAXA (+31 - +33). وللأسف، فإن التقنيات المستخدمة لتحديد الأليلات وتعاريف الأليلات premutation تختلف على نطاق واسع بين المسوح لذلك يكاد يكون من المستحيل مقارنتها. في أكبر (33)، تم فحص 21 248 X الكروموسومات و 41 (0.19٪) وجدت مع> 55 CGG يكرر. وتشير هذه البيانات إلى أن 1 في ~500 X كروموسوم يحمل premutation أليل الحجم على النحو المحدد من قبل روسو وآخرون. (33) على البقع الجنوبية. تواتر الأليلات المتوسطة وpremutation الحجم والكاملة X الطفرات الهشة قد تختلف أيضا بين مختلف السكان، وهذا يتوقف على توزيع النسخ المتنوعة ونمطها من AGG يتخلل يكرر.
وتشير البيانات المتوفرة لدينا أن الطفرات كاملة من الجينات FRAXE نادرة. كان هناك جدل حول FRAXE طفرة كاملة النمط الظاهري. على الرغم من أن الغالبية العظمى من الأفراد مع تحديد الطفرات الكاملة FRAXE لها التخلف العقلي البسيط (11، 15، 16)، والبعض الآخر قال أن لا تختلف كثيرا عن أفراد الأسرة الذين لا يحملون الطفرة (9). قد تكون هذه النتائج بسبب زواج المتجانسين بين السكان المتخلفين أقل ما يقال، وهو وضع لم توجد عادة في أشد المتخلفين، الذين لا يميلون إلى التكاثر. وكان صبي واحد درس الأليل FRAXE الموروثة unstably من 87 تكرارات، وعلى حد علمنا هذا هو أول مثال على premutation FRAXE التأكد في حالة عدم وجود طفرة المستلفت الكامل. ونادرا ما وصفت premutations غير مقنعة الفسيفساء في موضع FRAXE، على الرغم من premutation / الفسيفساء طفرة كاملة شائعة (11، 14، 16، 17). ندرة واضحة للpremutation FRAXE في الأسر التي تحور FRAXE كامل فصل قد يشير إلى أن premutations هي أقل استقرارا في FRAXE من FRAXA.
اكتشافنا لزيادة وتيرة الأليلات FRAXA وسيطة بين probands غير متوقع لأنه يعتقد أن الأليلات المتوسطة وpremutations ليس لها أي تأثير على الأداء الفكري (34 - 36). ومع ذلك، لا توجد دراسات التي الأداء الفكري في هشة ناقلات X premutation تم بصرامة مقارنة مع الأداء الفكري في عدد السكان التحكم المناسب. مؤخرا فقد تبين أن premutations ترتبط مع زيادة خطر فشل سابق لأوانه المبيض (37)، وربما أيضا من التوأمة (38)، لذلك قد يكون لديهم أيضا تأثير خفية على القدرة على التعلم. وجدنا فائض كبير مماثل من FRAXE الأليلات وسيطة بين الكروموسومات التجريبية. واذا تأكدت هذه الزيادة غير متوقع من الأليلات المتوسطة وpremutation لكلا FRAXA وFRAXE مواضع مستقل، فإنه سيتم تشير إلى أن هذه الأليلات ليست حميدة كما يفترض في السابق. ومن المثير للاهتمام، والتفتيش على بيانات من مسح واحد آخر على الأقل، حيث يتم مقارنة أحجام يكرر في الكروموسومات من الأفراد المتخلفين مع تلك الضوابط المناسبة، يشير إلى وجود ظاهرة مماثلة (39). التفسيرات المحتملة لهذا الفائض واضحا من الأليلات وسيطة ما يلي: (أ) التوسع في الأنسجة الجسدية لا عينات عادة مثل الدماغ. (ب) هيكل الثانوي غير عادي سواء على مستوى DNA أو الرنا المرسال، مع ما يصاحب ذلك تأثير سلبي على وظيفة الجين (40، 41)؛ و (ج) وجود جينات التخلف العقلي في الربط اختلال التوازن مع النسخ المتنوعة المرتبطة الأليلات كبيرة، أي 2-1-3 لFRAXA وDXS1691 أليل 3 لFRAXE.
ويظهر تحليل اختلال التوازن الربط على البيانات المتوفرة لدينا أن ستة علامات اختبار يمكن اعتبار مجموعتين منفصلتين، المجموعة 1 (DXS548، FRAXAC1، FRAXA وFRAXAC2) والمجموعة 2 (FRAXE وDXS1691)، مع الربط اختلال التوازن داخل المجموعات ولكن ليس بين المجموعات. وهذا ليس مستغربا، نظرا لبعد المسافة من 600 كيلو بايت بين المجموعتين. ومن الثابت أن الأليلات طبيعية كبيرة وFRAXA قبل والطفرات الكاملة وجدت في كثير من الأحيان مما كان متوقعا على 2-1-3 النمط الفرداني للمواضع DXS548، FRAXAC1 وFRAXAC2 على التوالي (26). وبالمثل في FRAXE، وارتبطت كل الأليلات المتوسطة ولكن واحدة مع أليل 3 من DXS1691 (جدول 4). كل من الطفرات FRAXE الكاملة الكشف سابقا من قبلنا (11، 14) وأيضا أليل 3 في موضع DXS1691 كما يفعل حالة premutation في الاستطلاع الحالي. فائض أليل 3 بالاشتراك مع كل كبيرة يكرر FRAXE العادية والأليلات طفرة كاملة إلى أن FRAXE الطفرات كاملة يمكن أن تنشأ من مجموعة من الأليلات العادية أو المتوسطة الكبيرة التي هي بشكل عشوائي غير المرتبطة DXS1691 أليل 3، ويتعرضون لخطر متزايد من التوسع، ويرجع ذلك يفترض أن حجمها.
فقد قيل لFRAXA أن آلية واحدة من تكرار التوسع الثلاثي قد ينطوي على خسارة من الثلاثي AGG من داخل تكرار CGG كحدث تغيري الأولي (42، 43). فإنه يفترض أن هذا الترقيم AGG من CGG تكرار محض خلاف ذلك يضفي الاستقرار على تكرار الجهاز أثناء النسخ المتماثل، وبالتالي ضياع AGG من شأنه أن يزيد من خطر عدم الاستقرار (44، 45). دليل حتى الآن يدل على أن تكرار FRAXE هو محض (46، 47)، وهذا يشير إلى أنه قد يكون من طول الرئيسي، إن لم يكن الوحيد، مؤشر مهم للاستقرار أليل FRAXE. على أساس من الأدلة الحالي، فإننا نقترح أن الأليلات> 30 تكرار (أي الطبقات نحن المتوسط ​​وpremutation) اعتبار أنها قد تكون غير مستقرة. هذه الأليلات نادرة، وهو ما يمثل 0.76٪ فقط من العينة. اثنين من هؤلاء، مع 37 و 66 على التوالي يكرر، ورثتها unstably.
هذه الدراسة على الذهاب يجمع عينة كبيرة من البيانات التي تشير لذلك، تقدير مؤقت جديد لل~1 في 5000 عن انتشار FRAXA. استمرار الدراسة لتشمل فإن مزيدا من 3000 الفتيان اختبار صقل هذا الرقم، وكذلك تقديم تقديرات أكثر دقة من انتشار FRAXE. الجمعيات المعترف بها بين النمط الفرداني، ثلاثي النوكليوتيد تكرار التحتية ونمط من عدم الاستقرار ينبغي أن تصبح أكثر وضوحا، مما التنبؤات أكثر ثقة لآلية (ق) من عدم الاستقرار. بالإضافة إلى ذلك، يجب أن بيانات أكثر موضوعية بشأن استقرار الأليلات المتوسطة ودورها المحتمل في الضعف العقلي الخفيف يساعد في حل المعضلات الهامة في الاستشارة الوراثية.

القسم السابق القسم التالي

المواد والأساليب

السكان المسح والاختبارات التي أجريت

من أجل تحديد الأولاد في المدارس الحكومية الذين كانوا يعتبرون أن يكون صعوبات التعلم والتي كان هناك أي سبب تأسيسها، اتصلنا المدرسين الأوائل في جميع مدارس الدولة 253 في مناطق الدراسة و 240 وافقت على المشاركة في المشروع. الحصول على الضباط الطبي مدرسة قائمة من الفتيان ذات الصلة في كل المدارس المشاركة. كان المسح لا الحصري، وأدرج أي صبي تعتبر صعوبات التعلم.
وكان السبب في ذلك رغبتنا في الحصول على الترددات للطفرة FRAXE التي يعتقد أنها تترافق مع وجود درجة خفيفة من صعوبات التعلم. عندما تم التعرف على مؤهل السكان للاختبار، اتصلنا الآباء برسالة يسأل أولا ما إذا كانوا مستعدين بالنسبة لنا للحصول على عينة فرشاة الفم من ابنهما وثانيا ما إذا كانت الأم نفسها ستكون مستعدة لتزويدنا عينة فرشاة الفم . إذا في غضون 3 أسابيع كان هناك أي رد على الرسالة الأولى لدينا، وأرسلت رسالة ثانية. ومع ذلك، إذا كان لدينا أي رد على الرسالة الثانية لم يتخذ أي إجراء آخر.

استخراج الحمض النووي وPCR

وقد زار كل المدارس المشاركة، واثنين من فرش الفم، واحدة من الجانب الداخلي من كل الخد، تم الحصول عليها من كل صبي لمن كان لدينا موافقة الوالدين. A مبطن، تناول تم إرسال مغلف يحتوي على اثنين من فرش الفم إلى كل أم بالتراضي مع إرشادات لأخذ العينات الذاتي. علقت خلايا الشدق من كل من فرش الفم (سلك الطبي والمعدات المحدودة، Corsham من، ويلتشير، المملكة المتحدة) في 500 ميكرولتر من العازلة إعادة تعليق (75 ملي كلوريد الصوديوم، 24.5 ملي EDTA، ودرجة الحموضة 8.0)، بالإضافة إلى بروتين K (0.3 ملغ / مل ) وSDS (0.2٪) وحضنت عند 37 درجة مئوية خلال الليل. تم استخراج DNA من قبل هطول الأمطار الملح تقنية (48). وكان بيليه معلق DNA الناتجة في 50 ميكرولتر من الشركة المصرية للاتصالات. وقد استخدم 1 ميكرولتر من محلول الحمض النووي في كل تفاعل PCR.
أجريت reations PCR الأولية خارج باستخدام بادئات قليل النوكليوتيد fluorescently المسمى المقدمة من خدمة DNA Oswel. تم تنفيذ اثنين من ردود الفعل PCR متعددة بها؛ لFRAXA وFRAXE تم استخدام حجم رد الفعل النهائي من 15 ميكرولتر مع 1X Amplitaq العازلة، 2.2 ملي كلوريد المغنيسيوم، 0.2 ملي dATP / dCTP / dTTP (سيغما)، و 10٪ dimethylsulphoxide (DMSO؛ سيغما)، 0.15 ملي 7-deaza dGTP ( بورنغير)، 0.05 ملي dGTP (سيغما)، 0.2 ميكرومتر الاشعال ج (المسمى 5 "مع 6-FAM) وو (31) و 0.7 ميكرومتر الاشعال 598 (المسمى 5" مع HEX) و 603 (11) و0.067 U / ميكرولتر من Amplitaq (بيركن إلمر قيطس). وقد أجريت PCR بها، بعد بداية ساخنة الأولي، لمدة 30 دورات تمسخ في درجة حرارة 95 درجة مئوية لمدة 1.5 دقيقة، الصلب عند 65 درجة مئوية لمدة 1 دقيقة والإرشاد عند 72 درجة مئوية لمدة 2 دقيقة، تليها التمديد النهائي عند 72 درجة C لمدة 7 دقائق. وكان ثنائي النوكليوتيد تكرار متعدد أيضا في حجم رد الفعل النهائي من 15 ميكرولتر زائد 1X Amplitaq العازلة، 1.5 ملي MgCl 2، 0.2 ملي dNTPs، 0.05٪ الجلسرين، 0.3 ميكرومتر الاشعال AC1A (المسمى 5 "مع تمرة) وAC1B (24)، 0.065 ميكرومتر الاشعال AC2A (المسمى 5 "مع 6-FAM) وAC2B (24)، 0.13 ميكرومتر الاشعال F322 (المسمى 5" مع HEX) وF010 (16)، 0.13 ميكرومتر الاشعال DXS548A (المسمى 5 "مع HEX) وDXS548B (1) و 0.05 U / ميكرولتر من Amplitaq (بيركن إلمر قيطس). وقد أجريت PCR بها، بعد بداية ساخنة الأولي، لمدة 10 دورات تمسخ في 94 درجة مئوية لمدة 1 دقيقة، الصلب عند 60 درجة مئوية لمدة 1.5 دقيقة والإرشاد عند 72 درجة مئوية لمدة 1.5 دقيقة. وأعقب ذلك جولة ثانية من التضخيم لمدة 25 دورات، من تمسخ في 94 درجة مئوية لمدة 1 دقيقة، الصلب عند 55 درجة مئوية لمدة 1.5 دقيقة والإرشاد عند 72 درجة مئوية لمدة 1.5 دقيقة، تليها التمديد النهائي في 72 ° C لمدة 7 دقائق. من كل ردود الفعل متعددة، كانت مختلطة 0.5 ميكرولتر مع 0.5 ميكرولتر من ROX 500 الجزيئية علامة الوزن (ABI / بيركن إلمر) و 1.5 ميكرولتر من العازلة صبغ الفورماميد، التشويه والتحريف وفصل على درجة التسلسل، 6٪، بولي أكريلاميد 7 M اليوريا هلام (GIBCO BRL). تم تشغيل المواد الهلامية على جهاز ABI 373A تمتد باستخدام 24 سم جيدا لقراءة لوحات لمدة 8 ساعات في 40 W، 2500 V و 35 مللي أمبير. وقد تم تحليل البيانات الجل على 672 GENESCAN البرمجيات (ABI / بيركن إلمر) ومن ثم استيرادها إلى برنامج GENOTYPER (ABI / بيركن إلمر) لتعيين الأليلات. بسبب التضخيم غير الكفء للlargerFRAXA وFRAXE الأليلات مع الاشعال الفلورسنت، وتتطلب رد فعل PCR التقليدية 32 P المسمى أحيانا (11، 27).
كما تقنية PCR كنا لا يميز بين أصحاب الزيجوت المتماثلة الألائل وhemizygotes لأي أليل و، كما أنها لا تضخيم العديد من التوسعات أكثر من 100 تكرار، فإنه ليس من الممكن التمييز بين الإناث الذين هم متماثل حقا في FRAXA أو FRAXE المكاني وذوي واحد أليل الحجم العادي وقبل أو كاملة طفرة أليل الثاني الحجم. لذلك، حصلنا على عينة دم من جميع النساء الذين ظهروا متماثل لFRAXA أو FRAXE الأليلات التي تردد المتوقع للزيجوت متماثلة الألائل كان <1٪ واختبار لهم عن طريق تحليل لطخة الجنوبي. هذا يعني أننا لم إعادة اختبار الإناث الذين كانوا على ما يبدو متماثل للالأليلات FRAXA مشتركة مع 29 و 30 و 31 تكرارات والأليلات FRAXE مع 14 و 15 و 16 و 17 و 18 تكرارات. نحن أيضا الحصول على عينة الدم من أي الشخص الذي ظهر من تحليل PCR الأولي لديهم أليل FRAXA مع> 50 تكرارات أو أليل FRAXE مع> 40 تكرارات، ويستخدم التحليل وصمة عار الجنوبي للتحقق من الممكن الاصباغ في نطاقات طفرة كاملة.

وصمة عار الجنوبية

الحمض النووي (0.5 ميكروغرام) وهضمها مزدوجة مع إما ايكو RI وBST ZI (حساسة للمثيلة) لبروتوكول FRAXA أو هند الثالث وليس الأول (حساسة للمثيلة) لFRAXE. وكانت المواد الهلامية نشف الجنوبية والمهجنة مع 32 ف المسمى التحقيق، StB12.3 لFRAXA (34) أو OxE20 لFRAXE (11).

القسم السابق القسم التالي

شكر وتقدير