عرض مشاركة واحدة
  #6  
قديم 01-03-2016, 08:47 PM
رافت ابراهيم رافت ابراهيم غير متواجد حالياً
عضو ذهبي
 
تاريخ التسجيل: Dec 2011
المشاركات: 520
افتراضي

 



تتلاقى خطوط نقطة أدلة على وجود الخلل المناعي في اضطراب طيف التوحد (ASD)، والتي يمكن أن تؤثر بشكل مباشر على العديد من العمليات العصبية النمائية الأساسية. وقد أظهرت دراسات سابقة مستويات أعلى خلوى في المرضى الذين يعانون من التوحد مقارنة مع الضوابط مطابقة أو الموضوعات مع اضطرابات النمو الأخرى. في الدراسة الحالية، كنا التنميط البلازما خلوى عن 25 زوجا الأخوة المتنافرة لتقييم ما إذا كانت هذه التغيرات تحدث داخل الأسر مع ASD.
طرق

وقد أجريت التنميط البلازما خلوى باستخدام شطيرة تعدد القائم على مجموعة ELISA لقياس الكمي في وقت واحد 40 هدفا فريدة من نوعها. نحن أيضا بتحليل العلاقات المتبادلة بين مستويات خلوى والصفات الكمية ذات الصلة سريريا (فينلاند التكيف السلوك مقياس في التوحد (VABS) درجة مركبة، الاستجابة الاجتماعية مقياس (SRS) مجموع النقاط T، محيط الرأس، وحاصل الذكاء الكامل (IQ)). بالإضافة إلى ذلك، بسبب عدم التجانس المظهري عال من ASD، حددنا أربع مجموعات فرعية من الموضوعات (أولئك الذين كانوا غير اللفظي، مع تلك القضايا في الجهاز الهضمي، وأولئك الذين يعانون من التوحد التراجعي، والذين لديهم تاريخ من الحساسية)، والتي تشمل شيوعا و/ أو endophenotypes المتكررة في ASD، واختبار مستويات خلوى في كل مجموعة.
النتائج

أظهر أيا من المعلمات قياس فروق ذات دلالة إحصائية بين الأطفال الذين يعانون من التوحد والأشقاء النامية عادة المتعلقة بهم. ومع ذلك، فإن مستويات مستهدفة محددة ترتبط مع الصفات السريرية الكمية، وهذه كانت مختلفة بشكل ملحوظ عندما تم تحليل المجموعات الفرعية ASD. ومن الجدير بالذكر أن هذه الاختلافات ويبدو أن تعزى إلى خلفية مستمنع المهيئة، كما لوحظ وجود فروق ذات دلالة أخرى بين أزواج الأخوة المتنافرة. انترلوكين 1β يبدو أن خلوى معظم المشاركين في الصفات الكمية والمجموعات الفرعية السريرية للASD.
النتائج

في هذه الدراسة، وجدنا عدم وجود فروق ذات دلالة إحصائية في مستويات البلازما خلوى بين الأطفال الذين يعانون من التوحد والأشقاء في غير التوحد ذات الصلة. وهكذا، نتائجنا تدعم أدلة على أن ملامح المناعية للأطفال المصابين بالتوحد لا تختلف عن الأشقاء النامية عادة الخاصة بهم. ومع ذلك، فإن ارتباط كبير من مستويات خلوى مع الصفات الكمية والمجموعات الفرعية السريرية تحليلها تشير إلى أن الاستجابات المناعية المعدلة قد يؤثر الميزة الأساسية لASD.
المقدمة

اضطرابات طيف التوحد (أي إس دي إس) هي مجموعة غير متجانسة من الاضطرابات العصبية النمائية الشديدة التي تتميز تفاعلات شاذة الاجتماعية، والاتصالات ضعف، والميل إلى الانخراط في السلوكيات الفقهي، المتكررة، أو تقييدا، مع بداية قبل 3 سنوات من العمر. وتشمل أي إس دي إس اضطراب التوحد، متلازمة اسبرجر، وتفشي التنموي وليس اضطراب ينص على خلاف ذلك (PDD-NOS) [1]. على الرغم من إحراز تقدم كبير في تحديد الجينات ونسخ عدد المتغيرات المرتبطة بالتوحد المتلازمة (حوالي 10٪ من العدد الإجمالي للحالات مع ASD) [2]، والقليل هو معروف حاليا عن مسببات مرض التوحد مجهول السبب غير المتلازمة. عدم تجانس السريري للASD ربما يعكس تعقيد الأسس الجينية، التي تنطوي على عدة مواضع المساهمة، والتباين الوراثي، قشوة، والتفاعلات الجينية للبيئة [3].
بالإضافة إلى نتائج البحوث العصبية الحيوية في ASD، وتسليط الضوء على الممرات المشتركة في التطور العصبي، المشبك اللدونة، تشوهات بنيوية في الدماغ والإدراك والسلوك، تتلاقى نقطة الأدلة إلى وجود الوظيفة المناعية المعدلة في ASD، والتي تؤثر بشكل مباشر بعض أو كل هذه العمليات العصبية [4]. تم الإبلاغ عن عدة تشوهات المناعية في ASD، بما في ذلك عائلي الذاتية التجميع الفوضى وأي إس دي إس [5]، غيرت التعبير الجيني، مما أدى إلى اختلال القاتلة الطبيعية (NK) الخلايا [6]، والتعديلات Transcriptome على جهاز المناعة في القشرة الزمنية من الموضوعات مع التوحد [7]، ووجود أضداد ذاتية في المخيخ في الأطفال المصابين بالتوحد [8]. في الواقع، تم الإبلاغ عن الأطفال الذين يعانون من التوحد لديهم مستويات أعلى من أضداد ذاتية (بما في ذلك البروتين الأساسي لمكافحة المايلين [9]، ويرتبط مكافحة المايلين بروتين سكري [10]، ومكافحة غانغليوزيد [11]، ومكافحة العصبية [12]، والمضادة للالميتوكوندريا [13] الأجسام المضادة) مقارنة مع الأطفال الأصحاء. وعلى الرغم من الأبحاث المكثفة ربط المخالفات في مأمن من أي إس دي إس، لا توجد نتائج البارزة التي أحرزت تقدما كبيرا في فهم التسبب في ASD.
الدراسات السابقة [14 - 25] وذكرت مستويات خلوى تغيير في الموضوعات مع التوحد مع نتائج غير حاسمة، وربما تعزى إلى أنواع مختلفة من تصميم الدراسة، ولكن أيضا ربما تعكس عدم التجانس واسعة من ASD. وبالإضافة إلى ذلك، وجدت دراسة واحدة لا فرق في مستويات خلوى بين الأطفال الصغار ASD والضوابط normotypic [26]. وعلاوة على ذلك، فقد تم فحص عدد قليل نسبيا من السيتوكينات حتى الآن، وفتحت التقنيات الحديثة وسائل إنتاجية أعلى لمسح كمي 10S إلى 100s من السيتوكينات فريدة من نوعها لكل عينة على صفيف. وقد أظهرت دراسات سابقة أن المرضى الذين يعانون من التوحد لديهم مستويات أعلى خلوى في حالات التوحد مقارنة مع الضوابط أو الموضوعات مع اضطرابات النمو الأخرى [14 - 25]. في الدراسة الحالية، قمنا بتقييم ما إذا كانت هذه التغيرات تحدث داخل الأسر مع ASD عن طريق أداء شامل التنميط البلازما خلوى في 25 زوجا الأخوة المتنافرة لASD. نحن أيضا بتحليل العلاقات المتبادلة بين مستويات خلوى والصفات الكمية ذات الصلة سريريا (فينلاند التكيف السلوك مقياس في التوحد (VABS) درجة مركبة، الاستجابة الاجتماعية مقياس (SRS) مجموع النقاط T، محيط الرأس، وحاصل الذكاء الكامل (IQ)). بالإضافة إلى ذلك، بسبب عدم التجانس المظهري عال من ASD، ونحن تقسيم المرضى إلى أربع مجموعات فرعية محددة (أولئك الذين كانوا غير اللفظي، مع تلك الجهاز الهضمي GI) قضايا (وذوي انتكاسة التوحد، والذين لديهم تاريخ من الحساسية)، التي تشمل / أو endophenotypes المشتركة والمتكررة في ASD، واختبار مستويات خلوى من هذه المجموعات [27 - +30].
المواد والأساليب

الموافقة الأخلاقية

وتمت الموافقة على بروتوكول الدراسة من قبل لجنة المراجعة المؤسساتية الغربية (WIRB، وعدد 20071224). تلقى جميع الآباء والأمهات وصفا شاملا للدراسة، وأعطى موافقة خطية مستنيرة للمشاركة أبنائهم.
المواد

وقد أجريت هذه الدراسة بعنوان "DNA، RNA، والبروتيوميات حالة السيطرة على دراسة الأفراد المصابين بالتوحد"، بالتعاون مع معهد بحوث الجينوم بالحركة (TGen، فينيكس، AZ، ​​الولايات المتحدة الأمريكية). وجرى تجنيد من قبل مركز جنوب غرب التوحد البحوث والموارد (السارك) (فينكس، AZ، الولايات المتحدة الأمريكية) استهدفت الدراسة عائلات بأكملها التي كان طفل واحد على الأقل في التشخيص السريري للمرض التوحد وفقا لمعايير DSM-IV (التشخيص والتشخيص الإحصائي والإحصائي للاضطرابات العقلية الصورة، التنقيح الرابع) [1]. للحد من التباس عوامل وراثية، وقد تم اختيار الذكور فقط أزواج الأخوة المتنافرة الذين تقل أعمارهم عن 15 سنة من العمر لتحليل خلوى. في المجموع، تم تسجيل 25 زوجا الأخوة.
لفترة وجيزة، تم الحصول على النفسية والطبية والاسرة وتاريخها من جميع المشاركين، وخضع المشاركون الاستبيانات والاختبارات السلوكية، الحسية، والمعرفية. وكانت جميع الموضوعات تجنيد خالية من أي علاج فعال مع وكلاء الدوائية أو غيرها. لمزيد من تميز اضطراب في كل المستلفت، جدول المراقبة تشخيص التوحد (ADOS) [31] وتشخيص التوحد المنقحة مقابلة (ADI-R) [32] كانت تستخدم من قبل البحوث المقيمون يمكن الاعتماد عليها. تم تقييم سير التكيف باستخدام VABS، تم تحديد ضعف السلوك باستخدام SRS [33]، وكان تقييم IQ باستخدام الميزان ستانفورد بينيه الذكاء (الطبعة الخامسة). وقد تم قياس محيط الرأس (محيط أمامي القذالي) باستخدام شريط القياس غير لمط مرنة متدرج في ملليمتر.
تحليل خلوى

تم جمع عينات الدم الطرفية من كل موضوع لتحليل البلازما قبل تنفيذ أي التجريب بها. تم جمع الدم الكامل في أنابيب جمع المغلفة EDTA (K 2 EDTA Vacutainer؛ BD، فرانكلين البحيرات، NJ، الولايات المتحدة الأمريكية). كان مقلوب الأنبوب 10 مرات لخلط الدم مع EDTA، وتخزينها على الجليد حتى مزيد من المعالجة. تمت معالجة كل أنبوب في غضون 4 ساعات من جمع. في جميع الحالات، لوحظ أن مدة من جمع إلى التجمد. تم فصل الدم عن طريق الطرد المركزي في 1000 × ز في جهاز للطرد المركزي الدلو المتأرجح ما قبل المبردة إلى 4 درجات مئوية. كان حصادها البلازما، وتنقسم الى 200 مكل، وتخزينها في -80 درجة مئوية حتى تحليل خلوى (لم تحدث تجميد أذاب دورات قبل التحليل).
أجري تحليل خلوى باستخدام شطيرة تعدد نظام ELISA القائمة على مجموعة (Quantibody® الإنسان التهاب صالحة، وتقوم صديقة-INF-3، RayBiotech، وشركة نوركروس، GA، الولايات المتحدة الأمريكية) لقياس الكمي في وقت واحد من 40 فريدة من نوعها التهابات السيتوكينات / كيموكينات (B- جاذب كيميائي لمفاوية (BLC، ويعرف أيضا باسم CXCL13)، eotaxin، eotaxin-2، محببة عامل تحفيز مستعمرة (G-CSF)، عامل تحفيز مستعمرة الكريات البيضاء بلعم (GM-CSF)، I-309، بين الخلايا جزيء التصاق (ICAM ) -1، انترفيرون (IFN) -γ، انترلوكين (IL) -1α، IL-1β، IL1 مستقبلات (IL-1RA)، IL-2، IL-4 و IL-5، IL-6 و rceptor لها للذوبان (IL-6sR)، IL-7، IL-8، IL-10، IL-11، IL-12p40، IL-12p70، IL-13، IL-15، IL-16، IL-17، والبروتين الوحيدات الكيميائي ( MCP) -1، بلعم عامل تحفيز مستعمرة (M-CSF)، monokine الناجمة عن انترفيرون غاما (MIG)، بلعم بروتين التهابات (MIP) -1α، MIP-1β، MIP-1δ، عامل النمو المشتق من الصفيحات (PDGF) -BB، ينظم على تفعيل الخلايا التائية العادية أعرب ويفرز (RANTES)، مثبطات أنسجة الفلزي (TIMP) -1، TIMP-2، عامل نخر الورم (TNF) -α، TNF-β، ومستقبلات للذوبان TNF-لانكا و TNF-sRII).
تم اختبار العينات وفقا لتعليمات الشركة الصانعة. لفترة وجيزة، تم تشغيل مجموعة واحدة لتحسين التخفيفات البلازما التي غالبية السيتوكينات أن يكون كميا داخل حدود مجموعة من الكشف (اللد). تم المخفف جميع العينات البلازما 1: 1 باستخدام عينة مخفف، وحضنت ثم 50 ميكرولتر من كل العينات المخفف والمعايير المعدة على المصفوفات في 4 درجات مئوية خلال الليل مع الهز لطيف. بعد عدة غسلات، تم إضافة كوكتيل الكشف عن الأجسام المضادة والمصفوفات المحتضنة في درجة حرارة الغرفة لمدة 2 ساعة مع الهز لطيف. بعد سلسلة أخرى من يغسل، تم إضافة streptavidin مترافق إلى صبغة يعادل CY3، والمصفوفات المحتضنة لمدة 1 ساعة مع الهز لطيف. بعد خطوة الغسيل الأخيرة، تم تصوير المصفوفات باستخدام ماسح ضوئي ميكروأري (اجيلنت ميكروأري الماسح الضوئي، اجيلنت، سانتا كلارا، كاليفورنيا، الولايات المتحدة الأمريكية) والبيانات مضان تم استخراج باستخدام البرنامج المرافق (اجيلنت البرنامج ميزة استخراج؛ اجيلنت). تم تحليل البيانات مضان الخام باستخدام برنامج Q-محلل لصفائف تقوم صديقة-INF-3 (RayBiotech، وشركة، نوركروس، GA، الولايات المتحدة الأمريكية)، الذي كان يستخدم لحساب تركيزات خلوى في الغرام / مل على أساس خطي من سبع نقاط تراجع منحنيات القياسية.
التحليل الإحصائي

لم توزيع البيانات الكمية بشكل طبيعي، وفقا لتقييم كولموجوروف الانحدار الخطي، وبالتالي فهي كما عرضت متوسط ​​± المجال الربعي (الربعية، وهذا هو، 25 لالمئوي ال75) أو مجموعة شبه الربيعي (الربعية / 2)، ويتناقض استخدام غير إحصاءات -parametric. تم تقييم الفروق بين أزواج الأخوة المتنافرة التي يلكوكسن اختبار مجموع رتبة. تم استخدام اختبار مان ويتني لمقارنة المتغيرات بين المجموعات المفردة. أجريت الارتباط بين مستويات خلوى والمتغيرات السريرية الكمية التي كتبها ارتباط رتبة سبيرمان (ρ). تم تعيين دلالة إحصائية عند P <0.05. وتعرض القيم P الاسمية، لأن مستويات خلوى كانت المتغيرات غير المستقلة، وتحت ظروف مماثلة، وتصحيح لاختبار متعددة لا تزال مثيرة للجدل [34، 35]. وقد أجريت جميع التحاليل باستخدام إحصاءات برنامج SPSS، (النسخة 18.0. SPSS شركة، شيكاغو، IL، الولايات المتحدة الأمريكية).
النتائج

المواد

وتتلخص الخصائص الديموغرافية والسريرية لجميع المشاركين في الجدول 1. لم يكن هناك اختلاف كبير في التوزيع العمري بين الأطفال الذين يعانون من التوحد والأشقاء الصحية الخاصة = 1.232، P = 0.218). كما هو متوقع، فإن جميع درجات VABS وSRS مختلفة إلى حد كبير بين المجموعتين (الجدول 1). كانت الموضوعات مع مجموعة ASD معدل الذكاء الكلي أقل بكثير مما فعلت مجموعة صحية الأخوة = -2.201، P = 0.028). كان محيط الرأس لا تختلف كثيرا بين الموضوعات مع ASD والأشقاء صحية = -0.805، P = 0.421). ومع ذلك، وذلك باستخدام اختبار موسى لردود فعل متطرفة، كانت فروق ذات دلالة إحصائية في نطاق بين المجموعتين لاحظت (P = 0.040). كان هناك نسبة أعلى من ضخامة الرأس (وهذا هو، ومحيط الرأس ...> المئين 97th أو +2 SD) في المجموعة مع ASD بالمقارنة مع الأشقاء المتصلة بها (30.0٪ مقابل 23.8٪). والجدير بالذكر أن هذه النسبة هي في حدود المبلغ عنها سابقا للسكان ASD [36].
الجدول 1. الخصائص الديموغرافية والسريرية من المشاركين في الدراسة

بلغت نسبة الأطفال الذين يعانون من التوحد الذين كانوا غير اللفظي (كما هو موضح في غياب كامل للكلمات واضح في وقت التقييم التشخيصي لمرض التوحد) 28.0٪. تم العثور على نفس النسبة المئوية للأطفال الذين يعانون من التوحد عرض القضايا GI (تقديم واحد على الأقل من الأعراض التالية: 1) والإمساك، و2) الإسهال، 3) في البطن والانتفاخ، وعدم الراحة، أو التهيج، 4) الجزر المعدي المريئي أو القيء، 5) التغذية قضايا أو الانتقائية الغذاء). انتكاسة التوحد (عندما يظهر الطفل على تطوير عادة ولكن بعد ذلك يبدأ في فقدان الكلام والمهارات الاجتماعية، وعادة ما تتراوح أعمارهم بين 15 و 30 شهرا، ويتم تشخيص مرض التوحد في وقت لاحق مع [28]) شوهد في 32٪ من مجموعة الدراسة، في حين أن 20٪ تاريخا من الحساسية.
لمحات خلوى من أزواج الأخوة المتنافرة

وقد تم تحليل الاختلافات في مستويات خلوى / chemokine بين أزواج الأخوة المتنافرة (انظر ملف إضافية 1: الجدول S1). أظهر أيا من المعلمات قياس فروق ذات دلالة إحصائية بين الأطفال الذين يعانون من التوحد والأشقاء صحية ذات الصلة بها. وعلاوة على ذلك، أجرينا التحليل اللاحق للكشف عن التغيرات المحتملة في T المساعد (ث) 1 (IL-2 + IFN-γ + TNF-α)، TH2 (IL-4 + IL-5 + IL-6 + IL-10 تم الكشف عن + IL-13)، وTh17 (IL-6 + IL-17) مستويات خلوى والنسب المتعلقة بها، ولكن لا فروق ذات دلالة إحصائية (لا تظهر البيانات).
ملف إضافي 1: الجدول S1 مستويات خلوى في الأطفال الذين يعانون من اضطراب طيف التوحد (ASD) والأشقاء صحية ذات الصلة بها. يتم التعبير عن البيانات كما هو الوسيط (المدى الربعي). تم إجراء تحليل البيانات باستخدام غير المعلمية عينتين تقرن اختبار قعت رتبة (يلكوكسن). Z عشرات ويتم الإبلاغ عن قيم P.
الشكل: DOC الحجم: 93KB تحميل الملف
يمكن الاطلاع على هذا الملف مع: مايكروسوفت وورد عارض
الارتباط بين مستويات خلوى والصفات الكمية

أجريت الارتباط بين مستويات خلوى والصفات الكمية ذات الصلة سريريا (VABS درجة مركبة، SRS مجموع النقاط T، محيط الرأس، وIQ الكامل) ل25 طفلا يعانون من التوحد، وذلك باستخدام ρ سبيرمان. نحن أيضا تقييم الارتباط بين السيتوكينات وسمة الكمية يجري بحثها (انظر ملف إضافية 2: الجدول S2). GM-CSF (ρ = -0.535، P = 0.007)، IL-1α (ρ = -0.622، P = 0.001)، IL-1β (ρ = -0.509، P = 0.011)، IL-2 (ρ = -0.426 كانت، P = 0.038)، IL-6 (ρ = -0.501، P = 0.013)، IL-16 (ρ = -0.450، P = 0.031) وMCP-1 مستويات (ρ = -0.533، P = 0.013) عكسيا المترابطة مع VABS درجة مركبة، في حين أن مستويات MIP-1δ كانت مرتبطة مباشرة مع VABS درجة مركبة (ρ = 0.475، P = 0.019). وأظهرت تقريبا جميع السيتوكينات ارتباط ملموس مع كل (ملف إضافية أخرى 3: جدول S3). IL-6sR (ρ = -0.502، P = 0.040)، MIP-1β (ρ = -0.524، P = 0.031) وMIP-1δ (ρ = -0.516، P = 0.034) المستويات المترابطة عكسيا مع مجموعه SRS النتيجة T. مستويات IL-6sR عرض ارتباط كبير مع MIP-1δ (ρ = 0.418، P = 0.038).
ملف إضافي 2: الجدول S2 يحلل العلاقة بين مستويات خلوى والصفات السريرية الكمية. أجري تحليل البيانات غير حدودي أجريت عن طريق تحليل رتبة ارتباط سبيرمان (ρ). وذكرت القيم R و P. وأبرزت نتائج هامة في جريئة.
الشكل: DOC الحجم: 110KB تحميل الملف
يمكن الاطلاع على هذا الملف مع: مايكروسوفت وورد عارض

ملف إضافي 3: الجدول S3 تحليل الارتباطات بين السيتوكينات المرتبطة VABS النتيجة المركبة. أجري تحليل البيانات غير حدودي أجريت عن طريق تحليل رتبة ارتباط سبيرمان (ρ). وذكرت القيم R و P. وأبرزت نتائج هامة في جريئة.
الشكل: DOC الحجم: 64KB تحميل الملف
يمكن الاطلاع على هذا الملف مع: مايكروسوفت وورد عارض

BLC (ρ = -0.474، P = 0.035) وTIMP 2 (ρ = -0.702، P = 0.001) يرتبط بشكل كبير مع محيط الرأس.
GM-CSF (ρ = -0.590، P = 0.026)، IL-1β (ρ = -0.709، P = 0.005)، IL-6 (ρ = -0.672، P = 0.009)، IL-7 (ρ = -0.670 ، P = 0.009)، IL-11 (ρ = -0.891، P = 0.00002)، IL-12p70 (ρ = -0.722، P = 0.005) IL-13 (ρ = -0.816، P = 0.0004)، IL-16 (ρ = -0.790، P = 0.001)، IL-17 (ρ = -0.798، P = 0.001)، M-CSF (ρ = -0.570، P = 0.033)، وTNF-sRII (ρ = -0.604، P = 0.029) كل المترابطة مع IQ الكامل. وأظهرت تقريبا جميع السيتوكينات ارتباط كبير مع بعضها البعض (انظر ملف إضافية 4: الجدول S4)، باستثناء TNF-sRII.
ملف إضافي 4: الجدول S4 .. تحليل الارتباط السيتوكينات المرتبطة حاصل ذكاء كامل. أجري تحليل البيانات غير حدودي أجريت عن طريق تحليل رتبة ارتباط سبيرمان (ρ). وذكرت القيم R و P. وأبرزت نتائج هامة في جريئة.
الشكل: DOC الحجم: 99KB تحميل الملف
يمكن الاطلاع على هذا الملف مع: مايكروسوفت وورد عارض
لمحات خلوى والمجموعات الفرعية السريرية

التحليلات لمحات خلوى في مجموعات فرعية السريرية أربعة، 1) الأطفال الذين يعانون من التوحد الذين كانوا غير اللفظي، 2) الأطفال الذين يعانون من التوحد مع تقديم قضايا GI، 3) الأطفال الذين يعانون من التوحد واظهار الانحدار، و4) الأطفال الذين يعانون من التوحد لديهم تاريخ من الحساسية أجريت، وذلك باستخدام اختبار مان ويتني (لمقارنة مستويات خلوى بين الأطفال مع ASD تقديم وأولئك الذين لا عرض المتغير السريري)، ووقع على العينة الثنائية اثنين يلكوكسن اختبار مجموع رتبة (لمقارنة مستويات خلوى بين أزواج الأخوة المتنافرة وفقا لمجموعة فرعية السريرية للموضوع مع ASD).
الأطفال غير اللفظي مع ASD عرض مستويات أعلى من GM-CSF = 2.330، P = 0.020)، IL-10 = 2.290، P = 0.022) وM-CSF = 1.970، P = 0.049) مما فعلت الأطفال اللفظي مع ASD (الشكل 1). والجدير بالذكر، GM-CSF يرتبط بشكل كبير مع IL-10 (ρ = 0.782، P = 1.062 × 10 -5) وM-CSF (ρ = 0.585، P = 0.002) المستويات، في حين IL-10 يرتبط بشكل كبير مع M-CSF ( ρ = 0.565، P = 0.005) المستويات.
الشكل 1. وقد زاد السيتوكينات في الأطفال غير اللفظي مع اضطراب طيف التوحد (ASD). الأطفال غير اللفظي مع ASD (ن = 7) وأشقائهم (ن = 7)، والأطفال اللفظي مع ASD (ن = 18) و أشقائهم (ن = 18). مربعات تمتد من 25 إلى المئين ال75، وخطوط عبر صناديق تشير إلى القيم الوسيطة، وخطوط تمتد من مربعات تشير القيم المتطرفة. دلالة إحصائية يقال (P <0.05).

كان الأطفال الذين يعانون من التوحد مع القضايا GI مستويات أعلى من IL-1β = 2.870، P = 0.004)، IL-2 = 1.970، P = 0.049) وIL-6 = 2.000، P = 0.046) مما فعلت الأطفال الذين يعانون من التوحد مع أي قضايا GI (الشكل 2). IL-1β ترتبط بشكل كبير مع IL-2 (ρ = 0.455، P = 0.022) وIL-6 (ρ = 0.556، P = 0.004) المستويات، وIL-2 يرتبط بشكل كبير مع IL-6 (ρ = 0.643، P = 0،001) المستويات.
الشكل 2. زيادة خلوى في الأطفال الذين يعانون من اضطراب طيف التوحد (ASD) مع الجهاز الهضمي (GI) قضايا. قمنا بتقييم الأطفال الذين يعانون من التوحد مع القضايا GI (ن = 7) وأشقائهم (ن = 7)، وكذلك الأطفال الذين يعانون من التوحد مع أي قضايا GI (ن = 18) وأشقائهم (ن = 18). مربعات تمتد من 25 إلى المئين ال75، وخطوط عبر صناديق تشير إلى القيم الوسيطة، وخطوط تمتد من مربعات تشير القيم المتطرفة. دلالة إحصائية يقال (P <0.05).

كانت IL-1β = 2.420، P = 0.016)، IL-5 = 2.060، P = 0.039) وIL-17 = 2.130، P = 0.033) مستويات أعلى في الأطفال الذين يعانون من التوحد مع الانحدار مما كانت عليه في تلك مع عدم وجود الانحدار (الشكل 3). IL-1β ترتبط بشكل كبير مع IL-5 (ρ = 0.523، P = 0.009) وIL-17 (ρ = 0.497، P = 0.012) المستويات، في حين IL-5 يرتبط بشكل كبير مع IL-17 (ρ = 0.484، P = 0.017) المستويات. ومن المثير للاهتمام، وكانت مستويات TH2 = 1.990، P = 0.047) وTh17 = 2.040، P = 0.041) السيتوكينات أعلى بكثير لدى الأطفال الذين يعانون من التوحد التراجعي مما كانت عليه في الأطفال الذين يعانون من ASD الذين ليس لديهم الانحدار. واعتبر لا يوجد فرق كبير في مستويات خلوى بين الأطفال الذين يعانون من التوحد الذين لديهم تاريخ من أمراض الحساسية، وأولئك الذين ليس لديهم تاريخ من الحساسية.
الشكل 3. زيادة خلوى في الأطفال الذين يعانون من اضطراب طيف التوحد (ASD) مع الانحدار. قيمنا الأطفال مع ASD (ن = 8) وأشقائهم (ن = 8)، وكذلك الأطفال الذين يعانون من التوحد دون الانحدار (ن ​​= 17) و أشقائهم (ن = 17). مربعات تمتد من 25 إلى المئين ال75، وخطوط عبر صناديق تشير إلى القيم الوسيطة، وخطوط تمتد من مربعات تشير القيم المتطرفة. دلالة إحصائية يقال (P <0.05).
نقاش

وعلى الرغم من ثروة كبيرة من البيانات على التوحد المكتسبة حتى الآن، واحتمال تورط جهاز المناعة في ASD، فإن النتائج لا تزال غير حاسمة. ويعزى ذلك ربما إلى المظهري كبير وعدم التجانس الوراثي للASD [37]. في محاولة لتحديد مكونات إمراضي المناعية المعقدة الكامنة ASD، قمنا بإجراء تحليل شامل للالسيتوكينات و chemokines في أزواج الأخوة المتنافرة. بحثنا الفرضية القائلة بأن استخدام أزواج الأخوة المتنافرة قد يقلل من عدم التجانس وتسهيل التعرف على الأسس المناعية في ASD.
لم نجد أي اختلافات كبيرة في مستويات خلوى بين الأطفال الذين يعانون من التوحد والأشقاء صحية ذات الصلة بها. وهذا يتماشى مع دراسة سابقة أجراها Saresella وآخرون. [38] والتي أظهرت أن ملامح المناعية للأطفال المصابين بالتوحد لا تختلف عن الأشقاء النامية عادة الخاصة بهم. وأشارت تلك الدراسة وجود 'endophenotype التوحد "أن يوسع الخلل المناعي لأفراد الأسرة الذين هم على ما يبدو غير متأثر الأعراض الأساسية للمرض التوحد. وعلاوة على ذلك، تم العثور على أجسام المضادة في الدماغ على حد سواء في الأطفال الذين يعانون من التوحد وأشقائهم لم تتأثر [39]. والجدير بالذكر أن تتميز الأشقاء صحية باعتلال عصبي خفية [+40 - 43]، وهناك أدلة على التنمية الاجتماعية والتواصل شاذة في مرحلة الطفولة [44]. كما وصفت الدراسات الحديثة ASD كما أقصى كمية من سلسلة متصلة العصبية النمائية في عموم السكان [45]، مع التوريث الجيني المعتدل والعنصر البيئي التوأم مشترك كبير [46]. وعلاوة على ذلك، فإن نسبة عالية من ضخامة الرأس وجدنا بين الأشقاء صحية (23.8٪) مقارنة مع التي أبلغت لعامة السكان (حوالي 3٪) [47] وتتفق مع الأدلة من endophenotype العائلية الموسعة. وهكذا، وجدت عدم وجود فروق ذات دلالة إحصائية بين أزواج الأخوة المتنافرة لASD في دراستنا يتماشى مع نتائج دراسات سابقة. فمن الممكن أن خلفية مستمنع المشتركة بين الأشقاء قد تؤدي في النهاية إلى نتائج سريرية مختلفة عندما يكون الإجهاد البيئي (على سبيل المثال، تعرض الجنين للسموم البيئية، والالتهابات الفيروسية والبكتيرية، microchimerism الوالدين، وما إلى ذلك) يحدث خلال التنمية.
ومع ذلك، فإن مستويات خلوى / chemokine في رعايانا ربط مع الصفات السريرية الكمية، وهذه كانت مختلفة بشكل ملحوظ عندما تم تحليل مجموعات فرعية السريرية (الشكل 4). ومن الجدير بالذكر أن هذه الاختلافات ويبدو أن تعزى إلى خلفية مستمنع المهيئة، كما لوحظ وجود فروق ذات دلالة أخرى بين أزواج الأخوة المتنافرة.
الرقم 4. يتم إعطاء جدول موجز السيتوكينات المرتبطة الصفات الكمية والمجموعات الفرعية السريرية تحليلها. نطاقات قيمة P للجمعية / الارتباط.

IL-1β يبدو أن خلوى الأكثر انخراطا في الصفات الكمية والمجموعات الفرعية السريرية للASD (الشكل 4). مشاركة IL-1β في الفيزيوباثيا التوحد ويدعم بشكل عام من قبل العديد من الدراسات الإبلاغ عن مستويات أعلى من هذا خلوى في البلازما من الأطفال الذين يعانون من التوحد، وارتفاع أداء الأطفال الذين يعانون من التوحد، والبالغين الذين يعانون من التوحد الشديد مقارنة مع الضوابط غير ذات صلة [48]. فقد تبين أن الخلايا الدموية المحيطية من الموضوعات مع ASD أنتجت مستويات أعلى من IL-1β سواء في الأساس وبعد التحفيز مع تول مثل مستقبلات (TLR) 2 او TLR4 [48]. وعلاوة على ذلك، تم العثور على مستويات البلازما من IL-1β لربط مع بداية تراجعية [20]، وهي نتيجة تتفق مع النتائج الحالية. أشووود وآخرون. [20] أظهرت أيضا أن زيادة مستويات خلوى حدثت في الغالب في الأطفال الذين لديهم شكل تراجعية من ASD. في هذا الإطار، كما وجدنا زيادة مستويات IL-1β، IL-5، وIL-17، جنبا إلى جنب مع مجموع مستويات خلوى TH2 وTh17، في الأطفال الذين يعانون من التوحد التراجعي مقارنة مع الأطفال الذين يعانون من التوحد الذين ليس لديهم الانحدار. كل هذه النتائج متوافقة مع الأدلة الثابتة أن مستويات العوامل المناعية يتم تغيير عند الأطفال الذين يعانون من التوحد التراجعي مقارنة مع الأطفال الذين يعانون من التوحد انحسارية [49 - 52]. ومن الجدير بالذكر أن وجدنا مستويات متزايدة من IL-5 في الأطفال الذين لديهم شكل تراجعية من ASD. والجدير بالذكر أن ارتفاع مستويات IL-5 في منتصف الحمل-عينات مصل الأم ويرتبط بشكل كبير مع زيادة 50٪ من خطر ASD في النسل، وخصوصا من انتكاسة التوحد [53]. وعلاوة على ذلك، تم الإبلاغ عن زيادة مستوى IL-5 في المواضيع الذكور مع ارتفاع أداء-اضطراب ASD / اسبرجر [17، 25]. ويتم إنتاج IL-5 من قبل خلايا TH2 والخلايا البدينة [54]. وظائفها هي لتحفيز النمو B-الخلية وزيادة إفراز المناعي. نموذج الفأر IL-5 المعدلة وراثيا خاصيتين السائدة: 1) زيادة ملحوظة في B-1 الخلايا، مما يؤدي إلى تعزيز مستويات الأجسام المضادة في مصل الدم، و 2) التوسع في أعداد الحمضات في الدم تسلل والحمضات في الأنسجة المختلفة [55]. وقد تبين وجود الأمهات أضداد ذاتية محددة للبروتينات دماغ الجنين أيضا أن يرتبط بقوة مع مرض التوحد الارتدادي [56].
وجدنا مستويات عدة السيتوكينات (GM-CSF، IL-1α، IL-1β، IL-2، IL-6، IL-16، وMCP-1) لتكون مرتبطة عكسيا مع درجة المركبة VABS. وقد أظهرت زيادة مستويات IL-1β، IL-6، وMCP-1 سابقا لتترافق مع سلوكيات أكثر الشاذة أو ضعف في وظيفة الادراك والتكيف من المرضى الذين يعانون من ASD [20، 48، 57]. تم العثور على مستوى MCP-1 إلى زيادة في الخلايا النجمية في التلفيف الحزامي الأمامي، وكذلك في المخيخ والمخ في الخليط الأنسجة في المرضى الذين يعانون من ASD [58]. وعلاوة على ذلك، لوحظ وجود زيادة 12 أضعاف في MCP-1 أيضا في السائل المخي الشوكي من الأطفال مع الأطفال ASD مقارنة مع الضوابط [58]. والجدير بالذكر، كما تبين أن MCP-1 التعبير يسببها IL-1 [59]. وبالتالي، فمن المعقول أن زيادة مستويات اثنين من السيتوكينات الموالية للالتهابات IL-1α وIL-1β قد تؤدي إلى التعبير عن MCP-1. وتجدر الإشارة إلى أن IL-6 لها دور حاسم في تطوير واللدونة للجهاز العصبي المركزي، وتبين أن زيادة كبيرة في المخيخ من الموضوعات مع ASD [60]. وعلاوة على ذلك، IL-6 overexpression في الخلايا الحبيبية يسبب ضعف في الالتصاق والهجرة من هذه الخلايا، وربما تغيير التصاق الخلايا العصبية والهجرة، ويسبب خللا في توزيع مثير ودوائر المثبطة. وعلاوة على ذلك، IL-6 يمارس تأثير سلبي صارخ من خلال تفعيل المناعي للأم على نمو مخ الجنين أثناء الحمل [61]. وبالإضافة إلى ذلك، وهو مستوى أعلى بكثير من IL-6 تم العثور سابقا في البلازما من الأطفال الذين يعانون من التوحد مقارنة مع الأطفال النامية عادة [20]. عموما، تجدر الإشارة إلى أن جميع السيتوكينات التي ترتبط عكسيا مع درجة مركبة VABS في دراستنا تمارس وظيفة الموالية للالتهابات. ويدعم هذا الاستنتاج الرأي القائل بأن زيادة يمكن لمستويات السيتوكينات الموالية للالتهابات تسهم في ضعف أكبر في السلوك، سمة من السمات الأساسية للASD، وخاصة العجز في التفاعل الاجتماعي والتواصل [4].IL-6sR، MIP-1β، وMIP-1δ كانت مرتبطة عكسيا مع مجموع نقاط SRS، مما يشير إلى دور مفيد إيجابي لتحقيق مستويات أعلى من هذه السيتوكينات في السلوك الاجتماعي المرتبطة بالتوحد. ومع ذلك، ينبغي أن تفسر هذه النتائج بحذر، لأن دور هذه السيتوكينات في ASD لا يزال غير واضح.
كما وجدنا علاقة اثنين من خلوى / كيموكينات (BLC / CXCL13 وTIMP-2) مع محيط الرأس، وهو أول تقرير من هذا القبيل، على حد علمنا. يمثل محيط الرأس واحدة من endophenotypes الأكثر موثوقية، متسقة، ويمكن اكتشافها بسهولة في البحوث التوحد. وقد سجلت ضخامة الرأس باستمرار في ما يقرب من 20٪ (المدى 14٪ إلى 37٪) من المرضى الذين يعانون من مرض التوحد[36]. ويعتقد المفرطة ثمرة neurite وانخفاض التقليم المحطة في مرحلة الطفولة للعب دور حاسم في إنشاء ضخامة الرأس[36]. وقد تبين أن TIMP-2[62] يؤثر ثمرة neurite، مما يجعل علاقة قوية مع محيط الرأس في هذه الدراسة معقولة للغاية. تأثير BLC / CXCL13 على محيط الرأس قد تنجم عن تفاعلها مع مستقبلات مسار IL-7[63]، والذي يؤثر بشكل كبير على ثمرة neurite[64، 65].
كما وجدنا ارتباطا بين مستويات البلازما من عدة السيتوكينات (GM-CSF، IL-1β، IL-6، IL-7، IL-11، IL-12p70، IL-13، IL-16، IL-17، M-CSF وTNF-sRII) مع IQ الكامل. ومن غير الواضح حاليا كيف يمكن أن يؤثر السيتوكينات IQ خلال مرحلة الطفولة في ASD، وبالتالي ينبغي أن تعامل هذه البيانات بحذر حتى يمكن إجراء مزيد من التحقق من الصحة.
ضعف اللغة هو سمة مشتركة من ASD، وبعض الأفراد مع ASD أبدا اكتساب اللغة [27]. الدراسات التي أجريت على FOXP2 الجين، والذي يرتبط إلى اضطرابات النطق واللغة، النقاب عن الدور الحاسم للخلايا المخيخ والعصبية في التسبب في اضطرابات النطق واللغة[66]. FOXP2 (R552H) الضربة القاضية في الفئران أظهرت النطق شديد بالموجات فوق الصوتية، الإعاقات الحركية، والخلايا العصبية غير ناضجة مع التشعبات الفقيرة وأقل نقاط الاشتباك العصبي [66].وجدنا زيادة مستويات GM-CSF، M-CSF، وIL-10 في الأطفال غير اللفظي مع ASD مقارنة مع الأطفال اللفظي مع ASD. الخلايا العصبية مستقبلات لكلا GM-CSF[67] وM-CSF[68]، وبالتالي فمن الممكن أن مستويات غيرت من هذه العوامل النمو اثنين تؤثر على نضوج الخلايا العصبية، مما يؤدي إلى ضعف اللغة. والجدير بالذكر أن يعرف IL-10 لتثبيط عمل GM-CSF[69]، وأيضا للعمل في تآزر مع M-CSF[70]، وبالتالي، مشاركتها في غير اللفظي ASD، جنبا إلى جنب مع أن من GM-CSF وM-CSF، يبدو تصور للغاية.
وجدنا أن الأطفال الذين يعانون من التوحد مع القضايا GI أظهروا مستويات أعلى بكثير من IL-1β، IL-2، وIL-6. وتيرة عالية نسبيا والطيف متغير من الأعراض المعدية المعوية، التي أبلغ عنها كثير من الآباء من الأطفال الذين يعانون من التوحد، يمكن أن تنبع تصور من مزيج معقد من الشاذ microbiome الأمعاء، نفاذية الأمعاء المفرطة، dysreactivity مأمن المحلية، والأدوار ربما عديد المظاهر من الجينات التوحد في الجهاز العصبي والقناة الهضمية الأنسجة[71]. في هذا السياق، يجب أن تكون الملاحظات التي زادت تركيزات IL-1β و2 IL قد ذكرت في بالمنظار عينات الخزعة المخاطية من المرضى الذين يعانون من مرض التهاب الأمعاء[72]. وقد تبين أيضا أن IL-1β وIL-2 الإنتاج زيادة كبيرة في التهاب القولون التقرحي النشط ويرتبط إلى حد كبير في مؤشر نشاطها[73]. زيادة مستوى IL-6 قد تنجم عن ارتفاع مستويات IL-1β وIL-2، واثنين من السيتوكينات التي تحفز IL-6 التعبير في حيدات الإنسان من قبل آليات مستقلة [74].
الارتباط وتكوين الجمعيات لا تعني السببية. وحتى لو افترضنا أن الآليات الفيزيولوجية المرضية تفعل السيتوكينات تصل إلى الصفات الكمية والمجموعات الفرعية السريرية التي تم تحليلها في هذه الدراسة، وطبيعة هذه الآليات لا تزال مفتوحة للتأويل. ومع ذلك، نتائجنا توفر أدلة مهمة لافتا تجاه الآليات الممكنة، والتي سوف تستحق التدقيق عن كثب في التحقيقات المستقبلية.
في حين أن الدراسات السابقة على البلازما / التنميط خلوى المصل في ASD تستخدم القائم على حبة صفائف تعليق [17، 20، 25، 26، 57]، وكنا مجموعة مستو. ويتألف مستو ميكروأري الكاشف لاختبارات فردية يجمد كصفيف أمر أو شبكة من المناطق كاشف منفصلة (نقاط) على سطح مستو (على سبيل المثال، شريحة المجهر)[75]. ويتكون شكل حبة ميكروأري بلي المشفرة (على سبيل المثال، مع كل توقيع مضان فريد)، والمغلفة لكل نوع من حبة مع كاشف مختلفة[75]. ويستند لدينا مجموعة مستو على أساس التكنولوجيا ELISA-ساندويتش، الذي يحقق أعلى حساسية وخصوصية، و هو الأسلوب المفضل لالبروتينات منخفضة وفرة [76]. وبشكل عام، فقد ذكرت معظم الدراسات حتى الآن علاقة جيدة بين صفوف القائم على حبة ومستو خلوى وبين المقايسات متعدد وELISA (التغيرات النسبية مقارنة) التقليدية، وبالتالي التوصية باستخدام استمرار وتوسيع نظم المتنوعة في تطبيقات فحص عالية الإنتاجية [77].
القيود

هذه الدراسة لديها العديد من القيود.أولا، ينبغي النظر إلى النتائج التي توصلنا إليها باعتبارها أولية، نظرا لصغر حجم العينة لدينا. ومع ذلك، فإن اعتماد معايير إدراج صارمة للالتحاق المريض وتقييم دقيق للمتغيرات السريرية ضمان خصوصية ويجب تعزيز استنساخ النتائج الحالية. ثانيا، وجدت عدة السيتوكينات سابقا لتترافق مع ASD، بما في ذلك IL-23، وتحويل عامل النمو (TGF) -β1، التنظيم النمو الورمي-α، وعامل مثبط بلعم)، لا يمكن قياسها من قبل مجموعة مقرها فحص تعدد نحن مستعمل ([4، 25]). وعلاوة على ذلك، سواء IL-23 و TGF-β1 هي المكونات الأساسية للاستجابة المناعية استنادا Th17. ونتيجة لذلك، دينا بيانات عن Th17 خلوى فرعية محدودة ويجب أن ينظر إليها بحذر.
الخلاصة

عموما، تقارير هذه الدراسة عدم وجود فروق ذات دلالة إحصائية في مستويات البلازما خلوى بين الأطفال الذين يعانون من التوحد والأشقاء غير التوحد ذات الصلة. وهكذا، نتائجنا تدعم أدلة على أن ملامح المناعية للأطفال المصابين بالتوحد لا تختلف عن الأشقاء النامية عادة على[38]. ومع ذلك، فإن ارتباط كبير من مستويات خلوى مع الصفات الكمية والمجموعات الفرعية السريرية تحليلها تشير إلى أن الاستجابات المناعية المعدلة قد تؤثر على الميزات الأساسية للASD[20]. لأن ASD قد تشمل عدة الظواهر متميزة، والتقسيم المحتمل للمجموعات فرعية ASD على أساس المعايير المناعية و / أو الجمعيات مع تفاقم السلوك قد تكون لها آثار هامة على التشخيص، وتصميم ورصد العلاجية من ASD[20]. ومن الواضح أن هناك ما يبرر إجراء مزيد من الدراسات لتأكيد وتمديد الجمعيات وجدت في هذه الدراسة، ويجب أن تتضمن أيضا تحليل الجزيئات الالتهابية الأخرى ذات الصلة، مثل أضداد ذاتية[9 - +13].

 

__________________
استشارى الادوية الطبيعيه وباحث وخبير فى علاجات التوحد
رد مع اقتباس