عرض مشاركة واحدة
  #12  
قديم 10-18-2015, 01:57 PM
رافت ابراهيم رافت ابراهيم غير متواجد حالياً
عضو ذهبي
 
تاريخ التسجيل: Dec 2011
المشاركات: 520
افتراضي الجمعيات والربط من الدوبامين الناقل الجينات ونقص الانتباه فرط النشاط لدى الأطفال: التجانس نظرا لتشخيص نوع الاشتراك والخطورة

 

http://www.sciencedirect.com/science...0292970761622X


نقص الانتباه وفرط الحركة (ADHD) يؤثر ~3٪ -5٪ من الأطفال في الولايات المتحدة. في التسميات النفسية الحالية، ويشمل ثلاثة أنواع فرعية ADHD: تفريط، النشاط الحركي الزائد والتسرع، وجنبا إلى جنب. في هذه الدراسة، كنا أربع استراتيجيات التحليلية لدراسة تكوين الجمعيات والربط بين الجينات نقل الدوبامين (DAT1) وADHD. وشملت العينة 122 طفلا المشار إليها العيادات النفسية لمشاكل السلوكية والتعليمية التي شملت ولكن لم يقتصر على ADHD، فضلا عن آبائهم وأشقائهم. داخل الأسرة تحليلات الربط اختلال التوازن، وذلك باستخدام اختبار اختلال التوازن الإرسال (TDT)، أكد أليل 480-BP كما أليل عالية المخاطر. في تحليل العلاقة بين الأسرة، وتتصل مستويات أعراض النشاط الزائد والاندفاع ولكن لا أعراض تفريط لعدد من DAT1 الأليلات عالية المخاطر. الأشقاء المتنافرة لعدد من DAT1 الأليلات عالية المخاطر مختلفتان بشكل ملحوظ في مستويات كل من أعراض النشاط الزائد والاندفاع وتفريط، مثل أن الأخوة مع عدد أكبر من الأليلات عالية المخاطر لديهم مستويات أعلى من ذلك بكثير أعراض. داخل الأسرة تحليلات الربط اختلال التوازن، وذلك باستخدام TDT، اقترح تكوين الجمعيات وربط ADHD مع DAT1 والتي كانت هذه العلاقة قوية خاصة مع مجتمعة ولكن ليس النوع الفرعي تفريط. علاقة DAT1 لADHD زادت مفردة النغمة، من منخفضة إلى متوسطة إلى مستويات عالية من شدة الأعراض. نتائجنا تكرار وتمتد النتائج السابقة للعلاقة بين الجين DAT1 وADHD في مرحلة الطفولة. وهذا يمثل واحدة من العلاقات تكرارها الأولى من الجينات مرشح واضطراب نفسي لدى الأطفال.
مؤلف كلمات

نقص الانتباه وفرط الحركة. DAT1. الجينات المرشحة؛ اختلال التوازن الربط. الطفل اضطراب نفسي. تباين التشخيص

تقديم

نقص الانتباه وفرط الحركة (ADHD) هو متلازمة المستمرة التي تتكون من أقصى مستويات النشاط الحركي، والأرق، والاندفاع، وعدم الانتباه. يؤثر ADHD ~3٪ -5٪ من الأطفال في الولايات المتحدة، مع المزيد من الأولاد أكثر من البنات يتم تشخيصها (الرابطة الأمريكية للطب النفسي 1994). في التسميات النفسية الحالية (جمعية الأمريكية للطب النفسي 1994)، ويشمل ثلاثة أنواع فرعية ADHD-تفريط، النشاط الحركي الزائد والتسرع، واستنادا مجتمعة على تجاوز عتبات أعراض على أبعاد المشكلة تفريط و / أو النشاط الحركي الزائد والتسرع. ADHD هو واحد من الاضطرابات الأكثر شيوعا في السكان السريرية الطفل. الأطفال الذين يعانون من ADHD معرضون لخطر متزايد لانخفاض التحصيل التعليمي، وانخفاض الدخل، والعمالة الناقصة، فضلا عن التسرب من المدرسة، والإجرام الكبار، وتعاطي المخدرات (Loeber وDishion 1983 (Mannuzza وآخرون 1993)؛ Lilienfeld والدمان 1990 ؛ Mannuzza وآخرون 1993) بحكم التداخل المتكرر بين ADHD واضطراب العناد الشارد (ODD)، اضطراب السلوك (CD)، والسلوك المعادي للمجتمع (Lilienfeld والدمان 1990؛. بيدرمان وآخرون 1991). على هذا النحو، ADHD والاضطرابات المرتبطة مثل CD ليست فقط مدمرة على حياة الأطفال المتضررين وأسرهم؛ كما أنها تخلق مشاكل اجتماعية خطيرة لأنها تحمل التكاليف الاجتماعية الكبيرة بسبب العدالة الجنائية، والرعاية الصحية، ومشاكل العمل.

وعلى الرغم من خطورة ADHD، لا يعرف الكثير عن أسبابه. في السنوات الأخيرة، ومع ذلك، فقد أصبح من الواضح أن التأثيرات الجينية تشكل جزءا هاما من مسببات ADHD. الأسرة (بيدرمان وآخرون 1990) واعتمادها وقد اقترح (موريسون وستيوارت 1973) الدراسات التي ADHD هو عائلي وأن التأثيرات الجينية يمكن أن تسهم في المسببات لها. الدراسات الحديثة التوأم في كل العينات غير القادرين على القراءة (جيليس وآخرون 1992) وعامة السكان (Silberg وآخرون 1996)، وذلك باستخدام أساليب التقييم المختلفة والفئات العمرية المختلفة، تتلاقى على الاستنتاج بأن ADHD هو معتدلة إلى الوراثية إلى حد كبير. على سبيل المثال، دراسة التوأم الأخيرة من مشروع القراءة كولورادو (Willcutt وآخرون 1995) قدرت التوريث من ADHD لتكون 0.80 في العينتين غير القادرين على القراءة والسيطرة، ودراسة التوأم الاسترالي الأخيرة (الدمان وآخرون 1994) يقدر التوريث من ADHD لتكون 0.89 في عينة المتطوعين من السكان الطفل العام. لم يكن هناك أي دليل على التأثيرات البيئية المشتركة (أي الخصائص البيئية من ذوي الخبرة مشتركة من قبل أفراد الأسرة التي تجعلها سلوكيا مماثلة) كان على ADHD في أي دراسة، والباقي 11٪ -20٪ من التباين ADHD بسبب التأثيرات البيئية nonshared ( أي، شهدت الخصائص البيئية فريد من قبل أفراد الأسرة التي تجعلها سلوكيا مختلفة).

على الرغم من أن الدراسات الجينية الكمية مثل تلك المذكورة أعلاه هي مفيدة في توفير تقديرات ملخص لحجم التأثيرات الجينية والبيئية على مسؤولية ADHD، فمن المهم أن نتجاوز مكونات التباين مجردة الناتجة عن الدراسات الجينية السلوك، لدراسة التكوين الجيني وعوامل الخطر البيئية. على الرغم من أن مجموعة من المحققين الحصول على نتائج من تحليل الفصل الذي اقترح الجينات من تأثير كبير لADHD (FARAONE وآخرون 1992)، وقد اقترح معظم الباحثين أن ADHD هو عديدة الجينات (أي، أن عددا كبيرا من الجينات، كل صغيرة نسبيا تأثير، من المحتمل التأثير على مخاطر الأطفال لADHD). وقد ركزت العديد من الدراسات الجينية الجزيئية من ADHD على الجينات التي تشارك في وظيفة الدوبامين، بسبب الدور المركزي للدوبامين في النشاط الحركي والسلوكيات طلبا للثواب. بعد تقارير عن وجود ارتباط بين الدوبامين D4 جين مستقبلات (DRD4) وسمة شخصية في البالغين الباحثين عن الجدة (بنيامين وآخرون 1996؛. ايبشتاين وآخرون 1996)، الذي يشبه إلى جوانب الاندفاع تظهر على الأطفال ADHD، وذكرت جمعية لDRD4 وADHD في الأطفال (LaHoste وآخرون 1996). رابطة الجين نقل الدوبامين (DAT1) وADHD كما تم الإبلاغ عن (كوك وآخرون. 1995). على الرغم من أن هذه الجمعية لم تتكرر في عينة صغيرة نسبيا أقل تضررا (LaHoste وآخرون 1995)، وتكرر ذلك في وقت لاحق من قبل فريق بحث مستقل (جيل وآخرون 1997). رابطة ADHD وDAT1 هي ذات أهمية خاصة، نظرا لأن الأدوية منبه نفسي التي هي العلاجات الأكثر شيوعا المفضل لADHD (على سبيل المثال، ميثيل وديكستروأمفيتامين) بذل آثارها الدوائية جزئيا عن طريق تثبيط الناقل الدوبامين، وبالتالي الحفاظ على كمية أكبر من الدوبامين النشط في الشق متشابك لفترة أطول من الزمن (العمارة وكوهار 1993). مزيد من الأدلة يشير إلى أهمية DAT1 لADHD يأتي من دراسة خروج المغلوب الجينات في الفئران (Giros وآخرون 1996). في هذه الدراسة، كانت الفئران التي كانت متماثلة اللواقح بالنسبة التعطيل من أليل DAT1 5-6 مرات أكثر نشاطا، وكان الدوبامين تبقى نشطة في متشابك المشقوقة 100 مرات أطول من الفئران متخالف والنوع البري.

في هذه الدراسة، سعينا لتكرار العلاقة بين DAT1 وADHD في مرحلة الطفولة، وكذلك لتمديده في عدد من الطرق، وذلك باستخدام أربعة أساليب تحليلية مختلفة. أولا، درسنا هذه العلاقة باستخدام كل بين الأسرة وداخل الأسرة تحليلات، ولكل منها مزايا واضحة الخاصة بهم. ثانيا، درسنا ما إذا كانت الجمعيات والربط بين DAT1 وADHD اختلفت عبر فرعية DSM-IV ADHD (الجمعية الأمريكية للطب النفسي 1994)، نظرا لأنها تؤكد على أعراض تفريط ومفرط والاندفاع وبدرجات متفاوتة، أن الجمعية التفاضلية والربط قد تشير إلى خصوصية الآثار السلوكية DAT1 ل. ثالثا، درسنا ما إذا كانت الجمعيات والربط بين DAT1 وADHD اختلفت بوصفها وظيفة من شدة الأعراض، بالنظر إلى أن شدة وقد ادعى أن يكون لمشرف الرابطة بين الجينات الدوبامين والاضطرابات النفسية الأخرى (على سبيل المثال، والدوبامين D2 مستقبلات الجينات [ DRD2] وإدمان الكحول، Neiswanger وآخرون 1995). رابعا، أجرينا تحاليل للتحقيق في طريقة عمل DAT1 فيما يتعلق ADHD لدراسة ما إذا كانت DAT1 بمثابة الجين السائد أو المتنحية. النتائج من جميع الأساليب التحليلية أربعة تشير بوضوح الجمعيات والربط بين DAT1 وADHD، مع بعض الخصوصية للأعراض النشاط الحركي الزائد والتسرع بالمقارنة مع الأعراض تفريط من الفوضى.


المواضيع

تكونت عينة الدراسة من 122 عائلة في الذي كان هناك طفل (أي المستلفت) الذي كان قد تم تقييم و / أو المعالجة لاضطرابات نقص الانتباه، واضطرابات سلوكية ذات الصلة، و / أو مشاكل في التعلم في عيادة متخصصة أو من قبل الأطباء النفسيين في القطاع الخاص الممارسة. شارك الأشقاء في 41 من هذه الأسر أيضا في الدراسة، كما فعل المتاحة وأولياء الأمور التعاون في جميع الأسر. وقد أجريت جمع البيانات في هذه الدراسة في موقعين البحوث: توكسون، أريزونا، واتلانتا، جورجيا. وتمت الموافقة على بروتوكول الدراسة من قبل مجالس المراجعة المؤسسية من كل من جامعة أريزونا وجامعة إيموري، وتم الحصول على الموافقة المسبقة المناسبة لجميع المواد الدراسية. في موقع توكسون، تم تحديد الأولاد الذين لديهم ADHD و / أو اضطراب ذات الصلة من خلال الأطباء النفسيين في القطاع الخاص. كلما أمكن ذلك، تم أخذ عينات أيضا شقيق الطفل المشار العيادة. في موقع أتلانتا، وأخذت عينات المشار عيادة الأطفال الذكور والإناث (أي probands) من خلال مركز التعلم واضطرابات نقص الانتباه في جامعة إيموري في كلية الطب. في هذا الموقع، وأخذت عينات من الإخوة والأخوات من probands أيضا كلما كان ذلك ممكنا. نحن تسمى بالعيادات probands أو الأطفال المشار الطبيب النفسي الخاص الذي جلب عائلة أصلا انتباه دراستنا ل. على الرغم من probands غالبا ما كان يشار لاضطراب السلوك المضطرب (أي ADHD و / أو ODD أو CD)، لم يكن لدينا الوصول إلى التشخيص النفسي الأصلية.

العينة الإجمالية للالتحليلات الواردة 117 أسر الأطفال المشار عيادة (من خلال الجمع بين مواقع توكسون وأتلانتا)، لأنه تم استبعاد probands في 5 من أسر 122 من التحليلات، وذلك بسبب فقدان البيانات الوراثي و / أو المظهري. وأظهرت البيانات التشخيصية والديموغرافية على probands وأشقائهم في العينة في الجدولين 1 و 2. لأغراض المقارنة، وتعرض أيضا بيانات من عينة ممثلة التوأم nonreferred من السكان الطفل جورجيا العام في الجدولين 1 و 2. جميع ولكن واحدة من probands تفي بمعايير لسلالة تشخيص ADHD بناء على استبيان لدينا (انظر وصف أدناه)، والتقى المستلفت المتبقية معايير ODD. وكان متوسط ​​عمر probands 9.26 سنة (SD = 2.75 سنة)، وكانت 74٪ من probands الذكور. وكان هناك حوالى الثلثين (68٪) من probands من كامل قوقازي العرق، مع 12٪ كائن من الهيئة افريقى الكامل، 4٪ من العرق اسباني كامل، والباقي 16٪ من أصول عرقية مختلطة. وكانت العينات المستلفت والأخوة مشابهة جدا في السن، والجنس، والعرق.

الجدول 1.

الإحصاء الوصفي على خصائص الخلفية ومشكلة السلوك الموازين لProbands، الإخوة والأخوات، والتوائم
Probands الأشقاء التوائم
سن 9.26 (2.75) 9.51 (3.37) 8.53 (2.96)
الجنس (٪ من الذكور) 74 79 49
العرق (٪ أبيض / أسود / أصل اسباني) 68/12 / 4A 68/15 / 2B 82/11 / 1C
مفرط / التسرع 2.14 (1.10) 1.02 (1.03) 0.71 (0.81)
تفريط 2.32 (0.83) 1.12 (1.04) 0.82 (0.95)
اضطراب المعارضة والعصيان 1.93 (1.08) 1.09 (0.92) 0.92 (0.84)
اضطراب السلوك 0.48 (0.50) 0.30 (0.41) 0.13 (0.22)
الاكتئاب / اكتئاب 0.61 (0.53) 0.28 (0.40) 0.15 (0.30)
N 111-117 37-41 709-756

ل

كانت باقي 16٪ من probands من أصول عرقية مختلطة.

ب

وكانت ال 15٪ الباقية من الأشقاء من أصول عرقية مختلطة.

ج

كانت باقي 6٪ من التوائم من أصول عرقية مختلطة.

خيارات الجدول

الجدول 2.

معدلات السلوك المضطرب تشخيص اضطراب لProbands، الإخوة والأخوات، والتوائم
التشخيص Probands الأشقاء التوائم
أي نوع ADHD:
منخفضة 0.98 0.64 0.40 شدة
متوسطة الشدة 0.85 0.32 0.18
ارتفاع شدة-0.66 0.22 0.09
جنبا إلى جنب من نوع ADHD:
منخفضة 0.79 0.32 0.18 شدة
متوسطة الشدة 0.53 0.15 0.06
ارتفاع شدة-0.35 0.07 0.02
نوع تفريط ADHD:
منخفضة 0.16 0.22 0.13 شدة
متوسطة الشدة 0.25 0.12 0.08
ارتفاع شدة-0.23 0.10 0.05
مفرط / نوع التسرع ADHD:
منخفضة 0.03 0.10 0.09 شدة
متوسطة الشدة 0.07 0.05 0.04
ارتفاع شدة-.08 .05 .02
المعارضة بخلل التحدي:
منخفضة 0.88 0.71 0.48 شدة
متوسطة الشدة 0.69 0.29 0.14
ارتفاع شدة-0.45 0.17 0.05
اضطراب السلوك:
منخفضة 0.38 0.27 0.13 شدة
متوسطة الشدة 0.22 0.12 0.02
ارتفاع شدة-0.14 0.07 0.01
N 111-117 37-41 709-756

ملاحظة.-

تم حذف تشخيص الاكتئاب / اكتئاب بسبب معدلاتها منخفضة حدوثها.

خيارات الجدول

طبيعة مختارة من العينة فيما يتعلق ADHD يمكن رؤيتها بوضوح في الجدولين 1 و 2. معدلات تشخيص ADHD، وخاصة الأنواع الفرعية المشتركة وتفريط في مستويات متوسطة وعالية الخطورة، هي أعلى بكثير في probands مما كانت عليه في الأشقاء أو التوائم. (والاستثناء الوحيد لهذا هو نوع فرعي النشاط الحركي الزائد والتسرع). تم تصنيف Probands العالي على أعراض النشاط الزائد والاندفاع وتفريط من على ODD، CD، وأعراض الاكتئاب / اكتئاب (وسائل كل البعد أعراض في الجدول 1 تمثيل تصنيف متوسط ​​لكل أعراض على نطاق و0-4، وبالتالي السماح الوسائل إلى أن تتساوى عبر أبعاد الأعراض التي تختلف في عددها الأعراض مكون).

على الرغم من الجدولين 1 و 2 توضح طبيعة مختارة من العينة المستلفت لADHD، كما أنها توضح تداخل كبير وcovariation من ADHD يعانون من اضطرابات أخرى. وعلى النقيض من عينة ADHD نقية، كانت probands (وإلى حد أقل أشقائهم) أرقام أعلى من الأعراض ومعدلات التشخيص من العينة التوأم غير محددة، وليس فقط لADHD ولكن لODD، CD، والاكتئاب / اكتئاب وكذلك . ونظرا لهذا التداخل مع ODD، CD، والاكتئاب، ونتائجنا هي أكثر تعميم من النتائج من عينة ADHD نقية، لأنه قد ثبت ADHD لتتداخل بشكل كبير مع هذه الاضطرابات في كل من المشار سريريا وعينات nonreferred (Lilienfeld والدمان 1990؛ بيدرمان وآخرون 1991).
الإجراءات
وإيموري التقييم التشخيصي مقياس

تم تصنيف Probands وأشقائهم من قبل والديهم على إيموري تشخيص مقياس التصنيف، والتي تم تطويرها من قبل احد منا (IDW) لتقييم أعراض رئيسية DSM-IV (الرابطة الأمريكية للطب النفسي 1994) الطفولة الاضطرابات النفسية. وتشمل هذه الأعراض من اضطرابات السلوك المضطرب (أي، CD، ODD، والغفلة وأبعاد فرط النشاط والاندفاع أعراض ADHD)، وكذلك أعراض استيعاب الاضطرابات (الاكتئاب الشديد / اكتئاب واضطرابات القلق، مثل اضطراب القلق العام، الرهاب الاجتماعي، ورهاب بسيط، فصل اضطرابات القلق، اضطرابات الهلع والخوف من الأماكن المكشوفة، واضطراب الوسواس القهري، اضطراب العرات وتوريت، واضطراب ما بعد الصدمة). وقد ترجم كل أعراض هذه الاضطرابات إلى عنصر تقييم النطاق الذي تم تصنيف الأطفال من قبل والديهم على نطاق و0-4، مع 0 معنى ليس في كل سمة من أطفالهم و 4 وهذا يعني الكثير جدا من سمات طفلهما. في هذه الدراسة، تم تحليل درجات على أبعاد أعراض النشاط الزائد والاندفاع وتفريط من ADHD. وقد لخص عشرات 0-4 لكل أعراض لكل من العناصر المكونة لأبعاد أعراض النشاط الزائد والاندفاع وتفريط، مما أسفر عن عشرات أعراض النطاق لكل المستلفت والأخوة. لأغراض المقارنة، تم إنشاؤها مماثلة عشرات أعراض النطاق لODD، CD، والاكتئاب / اكتئاب.

تشخيص هذه الاضطرابات هذه العوائد التدبير الاستبيان المستندة بالإضافة إلى عشرات أعراض مستمرة على نطاق. تسمح موازين أعراض التقييمات الكمية السلوك لأن تميز شدة وعدد من الأعراض على نطاق واسع. جداول سمة مستمرة بشكل أفضل للسكان، جمعية يحلل ويحلل مخالف السيب-الزوج لأنها تستخدم جميع المعلومات المتاحة. من ناحية أخرى، يحلل داخل الأسرة الربط اختلال التوازن مثل TDT تتطلب تسمية الأطفال "المتضررين" مقابل "لم تتأثر". ولهذا الغرض، وقد استمدت التشخيص القائم على الاستبيان من قطع العشرات على أبعاد أعراض مستمرة. تم تعيين Probands وأشقائهم تشخيص ADHD النوع الفرعي إذا كانت تجاوز عتبات التشخيص القياسية (أي ⩾6 من 9 أعراض) على غفلة و / أو أبعاد أعراض فرط النشاط، الاندفاع. تم تشخيص الأطفال الذين كانوا فوق عتبة في الأول من هذه الأبعاد العرض مع ADHD تفريط النوع الفرعي، تم تشخيص الأطفال الذين كانوا فوق عتبة على البعد العرض الثاني مع ADHD النشاط الحركي الزائد والتسرع النوع الفرعي، والأطفال الذين كانوا فوق عتبة على كل أبعاد أعراض تم تشخيص مع ADHD جنبا إلى جنب النوع الفرعي. واستخدمت عشرات 1، 2، 3 أو بالتناوب تشير إلى وجود أعراض في جعل التشخيص، مما يسمح التشخيص قد صدر في ثلاثة مستويات مختلفة من شدة الأعراض.
خصائص DAT1

الموقع الكروموسومات من DAT1 هو 5p15.3. وقد كشفت الدراسات الترددات أليل في مختلف قطاعات السكان (أي، المجموعات العرقية) تكرار 40-BP في هذا VNTR مع مجموعة من 3-11 يكرر، مع 9 و 10 تكرار (أي 440 نقطة أساس و 480 نقطة أساس) كونها أكثر المتكرر (Vandenbergh وآخرون 1992). الترددات أليل متشابهة إلى حد كبير عبر القوقاز والسكان من أصل اسباني، مع تردد 10-تكرار الأليل في ~71٪ و9-تكرار الأليل في ~27٪ في كل من المجموعتين (Doucette-ستام وآخرون 1995). وكانت الترددات أليل في السكان الأمريكيين من أصل أفريقي مماثلة للأليل 10 تكرار (72٪) لكنهما مختلفتان ل-تكرار 9 (17٪) والأليلات أكثر ندرة (12٪) (Doucette-ستام وآخرون 1995).

بما يتفق مع الدراسات السابقة، كان 10 تكرار الأليل الأكثر شيوعا (69٪) في عينة لدينا، تليها أليل 9-تكرار (29٪). قدم عدد من الأليلات نادرة حتى المتبقية 2٪ من الأليلات الموجودة في الأطفال المشار العيادة. وكانت الترددات الوراثية بما يتفق مع هاردي واينبرغ، التوازن. كما هو الحال في الدراسات السابقة (كوك وآخرون. 1995)، اعتبر 10-تكرار أليل أليل ذات المخاطر العالية في التحليلات، في حين تم دمج أليل 9-تكرار وكل الأليلات الأخرى، وتعامل على أنها الأليلات منخفضة المخاطر. تم اختبار هذه الفرضية من حالة شديدة الخطورة، وأكد عن طريق TDT.
استخراج الحمض النووي، والتنميط الجيني، والتهديف

أجريت جمع الحمض النووي، واستخراج، والتضخيم من مكان DAT1 عن طريق استخدام إجراءات نشرت سابقا (Vandenbergh وآخرون 1992؛. رو وآخرون 1998). وقد تم جمع الخلايا الشدق في 30 مل من 4٪ غسول الفم السكروز swished بقوة في الفم لمدة 1 دقيقة ثم تم تسليمها على الجليد في غضون 48 ساعة إلى المختبر. تم مكعبات الخلايا في 2000 ز لمدة 10 دقيقة، تم استخراج DNA فورا مع الأنسجة عدة QIAmp (QIAGEN) عن طريق استخدام بروتوكولات الشركة المصنعة للست] خلية النفط الخام، وحفظت العينات في TE (10 ملي تريس حمض الهيدروكلوريك، 1 ملم EDTA).

تم تضخيمه موضع DAT1 على cycler الحرارية MJ PTC100 (MJ للبحوث) في بروتوكول من خطوتين مع الأولية تغيير طبيعة الخطوة 1 دقيقة في 94 درجة مئوية، تليها 28 دورات من 10 ثانية في 94 درجة مئوية و 30 ق 74 ° C والتمديد النهائي من 2 دقيقة في 72 ° C باستخدام بادئات 5'-TGT GGT GTA GGG AAC GGC CTG AG-3 "و5'-CTT CCT GGA GGT CAC GGC TCA AGG-3" (Vandenbergh وآخرون 1992 ).

يتكون خليط التفاعل 10 ميكرولتر من 10 ملي تريس، حمض الهيدروكلوريك (الرقم الهيدروجيني 8.3)، 25 ملي بوكل، 3.0 ملي MgCl2، 200 ميكرومتر dNTPs، و 0.5 ميكرومتر لكل التمهيدي، 250 ميكروغرام مل-1 BSA، 2٪ (وزن / حجم) السكروز (وكيل زيادة الكثافة)، 0.1 ملي كريسول الأحمر (صبغ هلام التحميل)، 50 نانوغرام من الحمض النووي الجيني، و 0.3 وحدة من طق البلمرة (Stratagene Taq2000، Stratagene) كان قد حضنت سابقا مع 0.06 ميكروغرام طق البلمرة الأجسام المضادة (Clonetech TaqStart). بعد التضخيم، وelectrophoresed خليط التفاعل على هلام الاغاروز 2٪ وكان الملون في وقت لاحق في 1X SYBR الأخضر (FMC).

تم تحديد المورثات من الصور من مضاءة للأشعة فوق البنفسجية الهلام الملون من قبل اثنين على الأقل الباحثين. تم reamplified النتائج غامضة أو مجهولة الهوية، بينما rescored، كما كانت عينة عشوائية من 5٪ من probands. تم القضاء على العينات التي استمرت لتضخيم سيئة من مجتمع الدراسة.
استراتيجيات التحليلية

درسنا العلاقة بين DAT1 وADHD باستخدام كل بين الأسرة وداخل الأسرة الأساليب التحليلية. الطرق الرابطة بين الأسرة تتكون من فحص العلاقة بين عدد الأليلات عالية المخاطر (أي، 0، 1، أو 2) ومستويات أعراض ADHD. وقد لعبت بين الأسرة الأساليب التحليلية جمعية دورا هاما في الكشف عن الارتباط بين الجينات المرشحة والاضطرابات، ويتميزون بعدد من المزايا، التي تشمل القدرة الإحصائية عالية (Nothen وآخرون 1993 (Plomin وآخرون 1994)؛. Plomin وآخرون 1994)، وسهولة الاتصال، والتشابه في أساليب وبائية الكلاسيكية الحالات والشواهد. ومع ذلك، فإن هذه الأساليب أيضا عددا من العيوب، أهمها أن الارتباط بين اضطرابات والجينات المرشحة قد تكون إما بسبب الآثار المسببة لتلك الجينات أو عدم تجانس السكان. على وجه الخصوص، جمعية زائفة ويمكن الاطلاع لأن السكان المتضررين والسيطرة تختلف في كل من تواتر اضطراب وتردد أليل عالية المخاطر. وبالنظر إلى درجة عالية من التجانس السكاني في الترددات أليل لبعض الجينات ذات الأهمية المحتملة للاضطرابات النفسية (على سبيل المثال، الجين DRD2؛ البر وكيد 1993)، وهذا هو عامل التباس محتمل في العينات المسحوبة من سكان الولايات المتحدة العام. ومن المهم أيضا أن ندرك أن أي مصدر من الطبقات السكانية، وليس التجانس العرقي ببساطة، قد يؤدي إلى استنتاجات مصطنعة بشأن الجمعيات (Ewens وسبيلمان 1995).

داخل الأسرة اختبارات الربط اختلال التوازن (سبيلمان وآخرون 1993؛. Schaid وسومر 1994) تجنب الخلط بسبب التقسيم الطبقي السكان، لأن الأشقاء الكاملة يجب أن ينتمي وراثيا لنفس المجموعة الإثنية / العرقية (Schaid وسومر 1994). مثال واحد أنيق وبسيط لاختبار داخل الأسرة من اختلال التوازن الربط، وTDT (سبيلمان وآخرون 1993)، ويستند على الكشف عن انتقال غير المتكافئ للأليلات معينة من قبل الآباء متخالف للأطفال المتضررين. توقع مندلية ضمن الخالى من أي صلة أو رابطة هو إما أن أليل يحملها متغايرة لديه فرصة 50:50 انتقال العدوى إلى طفل مصاب. إذا أليل في الواقع يلعب دورا في تطوير هذه الصفة السلوكية، ومع ذلك، ثم انتقاله يجب أن يتجاوز 50٪.

وTDT له مزايا معينة اكثر من غيرها من الاختبارات جمعية داخل الأسرة، مثل السيطرة على الأسرة المتضررة (ا ف 1995) والنمط الفرداني أساليب المخاطر النسبية القائمة على النمط الفرداني (Schaid وسومر 1994؛ سبيلمان وEwens 1996). وتشمل هذه المزايا قوة أكبر الإحصائية، قوة ضد التحف الناجمة عن التقسيم الطبقي السكان، وتوفير تجربة الربط في وجود الجمعيات، والقدرة على تدرج في اختبار الربط (ولكن ليس الجمعيات) تأثر العديد من الأشقاء من عائلة دون الحاجة إلى تصحيح nonindependence. وبالنظر إلى هذه الميزات، اعتمدنا على تحليل داخل الأسرة باستخدام TDT كمصدر أساسي من الأدلة بشأن الجمعيات والربط بين DAT1 وADHD. نحن أيضا بتحليل بيانات من العائلتين الوالدين فقط، إهمال الأسر TDT مع البيانات من أحد الوالدين فقط، لتجنب التحيز التي تكبدتها إدراج هذه الأسر (كورتيس والشام 1995). وTDT التقليدي هو 1-DF اختبار McNemar X2، على النحو التالي: χ2TDT = (قبل الميلاد) 2 / (ب + ج)، حيث b هو عدد المرات التي تم نقلها أليل عالية المخاطر وج هو عدد المرات التي وأحيلت أليل منخفضة المخاطر.
النتائج

 

__________________
استشارى الادوية الطبيعيه وباحث وخبير فى علاجات التوحد
رد مع اقتباس